Arrestin hetero/oge Expression/l Mutagenese und biophy,sikalische Untersuchungen

78 ERGEBNISSE
Die Abb. 3.7. zeigt das Wachstum der verschiedenen Stamme auf SD-Medium. Der Stamm
YPH500 zeigt das fur die Expression ungiinstigste Wachstum unter diesen Bedingungen.
Bereits beim Erreiehen einer OD600 von 3,5 war die stationare Phase erreicht, somit ist unter
diesen Bedingungen keine groBe Biomasse erzeugbar. Der Vergleich der beiden Protease
defizienten Stlimme untereinander, zeigt eindeutig ein besseres Wachstum des haploiden
Stammes BJ2168. Dieser Stamm erreicht bei einer OD600 von 11 die stationare Phase. Der
diploide Stamm BJ2407 war schon bei einer OD600 von 8,5 in der stationliren
Wachstumsphase.
Wachstum auf SO
_,,::1(- .. _ ......;i( __ ..
·
--1
,
)<
8 12 16 ac 24 28 32 3' 40 44 48 52
8 12 16 eo 24 28 32 ae 42 55
--~~-
0,76 2,13 2,81 3,12 3,56 3,72 3,84 3,66 3,73 3,73
1,206 5,88 9,63 9,88 10,15 10,23 10,59 10,45 10,25 10,51
-_.__..__._--
0,92 4,74 7,98 -~.~~ 8,96 6,15 8,55 a 8,61 6,81 ,
0,35 1,94 5,28 10,14 11,01 10,54 11,19 to.!'! 12,2 , 14,11
Zelt(h)
Abbildung 3.7.: Wachstum der verschiedenen Hefestdmme anf Sfx-Minimalrnedium.
Tabellarisch dargestellt sind die aus Dcppelbestimmungen gemittelten MeBwerte der OD 600 • Graphisch ist die
OD6OQ linear in Abhhngigkeit von der Zeit dargestellt.
Der Stamm F11 zeigte erwartungsgemliB (3.2.3.) das schnellste Wachstum auf SD Medium.
Bereits nach 20 h war die stationlire Phase mit einer OD600 von 10 erreicht. Jedoch ist
anzumerken, daB die Zellen des Stammes F!! bei Wachstum auf Glukose groBe Zellaggregate
bilden, welche sich ohne Schiitteln im Kolben sehr schnell absetzen. Anzunehmen ist, daB
dadurch sowohl das Zellwachstum beeinfluBt, als auch die OD600-Messungen verfalscht
werden. Die groBen Zellaggregate gewahrleisten unter Umstanden keine ausreiehende
Versorgung der Zellen mit Sauerstoff und Nlihrstoffen. Dieser Faktor wiirde auch die
heterologe Expression beeinflussen, z.B, dadurch, daB die induzierende Substanz nur schlecht
oder gar nieht in die Zellaggregate eindringen kann. Somit wliren in einer solchen Kultur nur
ein Teil der Zellen induziert und zur Expression befahigt.