Arrestin hetero/oge Expression/l Mutagenese und biophy,sikalische Untersuchungen

ERGEBNISSE
3.8. Rontgenstrukturanalyse
rekombinantem Arrestin
von Kristallen aus
Die Methode del' Kryokristallographie bietet den Vorteil, daB Strahlenschaden am Kristall
reduziert werden, Somit konnen vollstandige und qualitativ bessere Daten an einem einzigen
Kristall gemessen werden (Stura & Chen, 1992). Durch Tranken del' Kristalle mit
Kryoprotektaten wird ein Kristallisieren del' Mutterlauge in den Solvenskanalen zwischen den
Proteinmolekiilen verhindert. Die am haufigsten verwendeten Kryoprotektate sind
Ethylenglykol und Polyethylenglykole. Im Fall von Arrestin sind diese zwar in hohem MaBe
in del' Mutterlauge enthalten (2.3.1.), jedoch optimiert eine zusatzliche Inkubation mit
Glutaraldehyd das Einfrieren del' Kristalle (J. Granzin, pel's. Mitteilung). Del' ProzeB des
Einfrierens hat einen erheblichen EinfluB auf die Diffraktionsqualitat eines Kristalls und somit
auf die maximale Auflosung del' Rontgenbeugungsdaten.
3.8.1. Untersuchungen an nativen Kristallen
Die Messungen an nativen Kristallen wurden an einem Drehanoden-Rontgengenerator unter
Kryobedingungen (T=100K) (2.16.1,) vorgenommen, und dienten del' Bestimmung von
Symmetrie und Gitterkonstanten. Die Ergebnisse sind in Tab. 3.8. zusammengefasst.
Tabelle 3.8.:
Protein Gitterkonstanten Raumgruppe
[A,]; «(X=~=y=900) (orthorhombisch)
T=100K
Arrestin aus a=171.22 P2j212
dem Rinderauge b=188.77
c=90.93
MRGS-6His- a=171.66 P2 12 j2
Arrestin b=190.0
c=91.83
Arrestin-6His a=168.62 P2 j2j2
b=185,17
c=90.68
Arrestin- a=167.98 P2 12 12
StrepTagII b=186.31
c=90.47
Die rekombinanten, nativen Proteine kristallisieren in del' gleichen Raurngruppe wie das
wildtypische, native Arrestin aus dem Rinderauge, nul' die Gitterkonstanten variieren leicht.