16 057 EVOLUCIÓN DE LA RESISTENCIA A QUINOLONAS EN ENTEROBACTERIAS EN EL LABORATORIO CENTRAL ÁREA 1 IMSALUD MADRID LUCENDO ABARCA, M.; PEREZ LUCENDO, A.; PEREZ MAROTO, F.; FRAGOSO RECIO, M.; SAN JUAN LARIN, C.; HERNANDEZ ALVAREZ, E.; GARCIA MARCOS, M.; HERRANZ PUEBLA, M.; Cep Vicente Sol<strong>de</strong>villa - Madrid Introducción: Se ha realizado un estudio retrospectivo en el laboratorio central Área 1-Imsalud- Madrid, <strong>de</strong> la evolución <strong>de</strong> la resistencia a quinolonas en enterobacterias <strong>de</strong>s<strong>de</strong> Enero 2005 (fecha en la que se produjo la fusión <strong>de</strong> todos los laboratorios <strong>de</strong>l Área) hasta Mayo <strong>de</strong>l 2007. Las enterobacterias más significativas en nuestro laboratorio son: E.coli, K. pneumoniae y P. mirabilis. Material Y Métodos: Las orinas se sembraron con asa calibrada <strong>de</strong> 10 µl en placas cromogénicas CPS ó Cromogen. Se realizó el antibiograma en paneles Microscan UC 1S y NUC 37, específicos <strong>de</strong> orina. Para la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> los puntos <strong>de</strong> corte se aplicaron los criterios <strong>de</strong> la NCCLS/CLSI Se estudiaron quinolonas <strong>de</strong> 1ª generación: ac. Nalidíxico y ac. pipemídico, <strong>de</strong> 2ª : norfloxacino y <strong>de</strong> 3ª: ciprofloxacino, ofloxacino y levofloxacino. Resultados: El total <strong>de</strong> orinas positivas fue 24939 distribuidas en: • 2005: 9263 positivas que correspon<strong>de</strong>n a E. coli 5697 (65%), K pneumoniae 671 (8%), y P. mirabilis 441 (5%). • 2006: 11242 positivas que correspon<strong>de</strong>n a E. coli 7217 (64%), K pneumoniae 777 (7%), P. mirabilis 588 (5%) • 2007: 4901 positivas que correspon<strong>de</strong>n a E. coli 3099 (63%), K pneumoniae 382 (8%), P. mirabilis 279 (6%). Las resistencias obtenidas fueron: • 2005: en cuanto al E. coli 1ª generación 38%, 2ª generación 25%, 3ª generación 25%, para la K. pneumoniae 1ª generación 23%, 2ª generación 5%, y 3ª generación 7%., para P. mirabilis 1ª generación 20%, 2ª generación 7%, 3ª generación 8% • 2006: en cuanto al E. coli 1ª generación 38%, 2ª generación 25%, 3ª generación 25%, para la K. pneumoniae 1ª generación 32 %, 2ª generación 4 %, 3ª generación 4%, para P. mirabilis 1ª generación 22%, 2ª generación 11%, 3ª generación 4% • 2007: en cuanto al E.coli 1ª generación 42%, 2ª generación 30%, 3ª generación 28%, para la K. pneumoniae 1ª generación 40%, 2º generación 7%, 3ª generación 4%, para el P.mirabilis 1ª generación 24%, 2ª generación 11%, 3ª generación 6%. Conclusiones: Las quinolonas <strong>de</strong> 1ª generación ofrecen mayor resistencias frente a los tres gérmenes estudiados E. coli es el que presenta mayor resistencias frente a las quinolonas, podría ser <strong>de</strong>bido a que es el germen más aislado en infecciones urinarias. Con el paso <strong>de</strong> los años se observa un leve aumento <strong>de</strong> resistencias en los tres gérmenes 058 EVALUACIÓN DE UN SISTEMA AUTOMÁTICO PARA LA REALIZACIÓN DE SCREENING DE INFECCIONES URINARIAS MOREDA VÁZQUEZ, A.; PEG RODRÍGUEZ, V.; AELLANO ABAD, P.; CÁMARA FERNÁNDEZ, E.; H. "Royo Villanova".- C.M.E. "Gran<strong>de</strong> Covián" - Zaragoza Introducción: En nuestro Laboratorio recibimos aproximadamente 150 orinas diarias con petición <strong>de</strong> estudio microbiológico. Este volumen <strong>de</strong> muestras nos ha obligado a buscar métodos fiables <strong>de</strong> screening para obtener, en un tiempo razonable, información <strong>de</strong> las muestras positivas y <strong>de</strong>scartar las negativas (en nuestra sección <strong>de</strong> Microbiología un 80-85 %). Esto nos permite dar una información más rápida al médico solicitante y evita sembrar un gran número <strong>de</strong> orinas que consumirían recursos humanos y materiales inútilmente. Material Y Métodos: UF-100 (Toa Electrónica, Kobe Japón, suministrado por ROCHE Diagnostics): El Sysmex® UF-100, es un analizador, completamente automatizado, <strong>de</strong> muestras <strong>de</strong> orina para el diagnóstico in vitro <strong>de</strong> especimenes clínicos. El instrumento es un dispositivo médico que tiene por objeto reemplazar la revisión al microscopio <strong>de</strong> algunas muestras con anormalida<strong>de</strong>s. El laboratorio es responsable <strong>de</strong> la revisión final <strong>de</strong> dichas anormalida<strong>de</strong>s. Aspira, mezcla y analiza <strong>de</strong> forma automática los elementos formes <strong>de</strong> la orina utilizando tecnología <strong>de</strong> citometría <strong>de</strong> flujo. La enumeración <strong>de</strong> cinco elementos (hematíes, leucocitos, células epiteliales, cilindros y bacterias) es hecha automáticamente usando las medidas directas <strong>de</strong> luz dispersa, luz fluorescente e impedancia. Nuestra Metodología Habitual Todas las muestras son procesadas en los sistemas Urisys 2400. Posteriormente son sembradas en medios <strong>de</strong> cultivo agar-sangre y Cled con asa calibrada (00,2 ml.), y, tras incubación a 37º C durante 24 horas, establecemos las positivas por la presencia <strong>de</strong> = 100.000 UFC/ml (Unida- <strong>de</strong>s formadoras <strong>de</strong> colonias). Para la consi<strong>de</strong>ración final <strong>de</strong> orina infectada causante <strong>de</strong> una posible UTI (Infección <strong>de</strong> tracto urinario) valoramos también la presencia <strong>de</strong> leucocitos(› 25) informada por el Urisys 2400. Muestras: Se estudian 2520 muestras comparando los resultados obtenidos por el UF-100 con los encontrados en el cultivo. Criterios a`licados al UF-100 para consi<strong>de</strong>rar a una muestra como proce<strong>de</strong>nte <strong>de</strong> UTI. Criterio 1 Contaje <strong>de</strong> bacterias › 8040 /ml. Criterio 2 Contaje <strong>de</strong> bacterias › 5000 /ml. Criterio 3 Contaje <strong>de</strong> bacterias › 2573 /ml. y Leucocitos › 10 Criterio 4 Screening mixto: contaje › 8040 /ml. + contaje › 2573 /ml. y WBC › 10 I Congreso Nacional <strong>de</strong>l Laboratório Clínico – Sevilla, 17/20 Octubre 2007 059 ESTUDIO RETROSPECTIVO DE MALARIA EN EL HOSPITAL NIÑO JESUS ENTRE 1996-2006. MARTINEZ LAPERCHE, C.; GOMEZ GARCIA, A.; CLEMENTE GARULO, D.; Hospital Nño Jesus - Madrid Introducción Y Objetivos:El paludismo o Malaria esta originado por un protozoo( Plasmodium spp) transmitido a traves <strong>de</strong> la picadura <strong>de</strong>l mosquito anopheles. Es una <strong>de</strong> las zoonosis mas extendidas <strong>de</strong>l mundo, siendo en<strong>de</strong>mica en 100 paises. Segun la OMS cada año se producen en el mundo mas <strong>de</strong> 100 millones <strong>de</strong> casos, con mas <strong>de</strong> 1 millon <strong>de</strong> muertes <strong>de</strong> las que el 90% tienen lugar en Africa subsahariana. Su inci<strong>de</strong>ncia en nuestro medio esta aumentando <strong>de</strong>bido: inmigracion <strong>de</strong> paises en<strong>de</strong>micos <strong>de</strong> malaria, el aumento <strong>de</strong> viajes al extranjero, el aumento <strong>de</strong> adopciones internacionales y la acogida <strong>de</strong> refugiados <strong>de</strong> regiones en<strong>de</strong>micas. Nuestro objetivo es <strong>de</strong>scribir los casos <strong>de</strong> malaria en el Hospital Niño Jesus durante 10 años. Material Y Metodos: Los pacientes objeto <strong>de</strong>l estudio se seleccionan a partir <strong>de</strong> casos <strong>de</strong>clarados en el HNJS entre 1996-2006. Se recogieron las siguientes variables: sexo, edad, pais <strong>de</strong> origen, sp <strong>de</strong> plasmodium, episodios previos, quimioproflilaxis, manifestaciones clinicas, alteraciones hematologicas, tratamiento, dias <strong>de</strong> estancia hospitalaria y complicaciones durante el ingreso. Resultados:Se estudiaron 28 pacientes( 16 varones y 12 mujeres). Todos procedian <strong>de</strong> un area para Malaria.Guinea Ecuatorial 25(89,3%)Brasil 1, India 1, Ecuador 1. 16 pacientes habian regresado a su pais por motivos familiares o vacaciones,9 habian llegado el mes previo a España 3 eran adoptados y 2 traslados <strong>de</strong> una ONG.No se realizo quimioproflilaxis antipaludica en 26 casos, y en 2 <strong>de</strong> forma incompleta. Conclusion: Debido al aumento <strong>de</strong> inmigracion viajes y adopciones internacionales cada vez es mas frecuente el diagnostico <strong>de</strong> malaria en niños en España. Debe sospecharse en niños con fiebre y/o anemia y/o hepatoesplenomegalia que regresen <strong>de</strong> un area en<strong>de</strong>mica <strong>de</strong> Malaria, in<strong>de</strong>pendientemente <strong>de</strong> la quimioproflilaxis realizada. El retraso en la instauracion <strong>de</strong>l tratameinto pue<strong>de</strong> suponer la aparicion <strong>de</strong> complicaciones como anemia severa y secuelas neurologicas. La quimioprofilaxis se realizo solamente en 2 casos, por lo que habria que intentar instaurar programas <strong>de</strong> educacion sanitaria a la poblacion , tanto los inmigrantes que viajan a su pais <strong>de</strong> origen como a la poblacion que viaja por turismo a zonas en<strong>de</strong>micas <strong>de</strong> Malaria. 060 PERFIL DE RESISTENCIA DE LAS BACTERIAS AISLADAS EN INFECCIONES DEl TRACTO URINARIO EN EL HOSPITAL”LA INMACULADA” DE HUERCAL-OVERA. NAVARRO MARTINEZ, M.; JIMENEZ MACHADO, M.; JIMENEZ TORRES, R.; GARCIA CABALLERO, F.; SANCHEZ FORNIELES, E.; Hospital "La Inmaculada" De Huercal-Overa - Huercal-Overa (Almeria) Objetivo Conocer el perfil <strong>de</strong> resistencias <strong>de</strong> las bacterias más frecuentemente aisladas en infecciones <strong>de</strong> orina (ITU) en nuestro hospital, con el fin <strong>de</strong> a<strong>de</strong>cuar en lo posible el tratamiento empírico cuando éste sea necesario. Material y métodos Se estudió la sensibilidad <strong>de</strong> los microorganismos que con más frecuencia se aislaron en muestras <strong>de</strong> orina durante el año 2006 en el ámbito hospitalario (E.coli 72%, K. pneumoniae 9% , E. faecalis 6% y P.aeruginosa 3%), con respecto a <strong>de</strong>terminados antibióticos ampliamente utilizados: Amoxicilina (AMX), Amoxicilina –Clavulánico (AMC), Cefotaxima (TAX), Aztreonam (AZT), Imipenem (IMI), Ciprofloxacino (CP), Levofloxacino (LVX), Gentamicina (GM), Amikacina (AK), Fosfomicina (FOS), Tobramicina (TO) y Cotrimoxazol (TMS). La <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong>l antibiograma se realizó mediante el método automatizado Microscan Walk Away ® (Da<strong>de</strong> Behring Inc). Resultados Para E.coli se obtuvo un 30 % <strong>de</strong> resistencia frente a AMC, un 32% frente a AZT, un 26% a TAX, 36% a CIP, mientras que un 34% fue resistente a LVX y un 35% a TMS. TO, GM, FOS e IMI, fueron más activos, con resistencias <strong>de</strong>l 14, 8, 2 y 0 % respectivamente. Para K. pneumoniae, las resistencias mayores fueron <strong>de</strong> un 25% a CIP, 18% a LVX, 22% a TMS y 17% a FOS. La mayoría <strong>de</strong> las cepas fueron sensibles a AMC, con un 12 % <strong>de</strong> resistentes, y 8% para GM y TO. La sensibilidad a AZT, IMI y TAX fue <strong>de</strong>l 100%. En cuanto a los E. faecalis un 33% fue resistente a quinolonas, si bien todos ellos eran sensibles a AMX. El 30% presentó resistencia <strong>de</strong> alto nivel a aminoglucósidos. No se observó disminución en la sensibilidad a Vancomicina. P.aeruginosa mostró una resistencia a CP <strong>de</strong>l 40% y <strong>de</strong>l 12% frente a LVX, AZT y GM. Todas las cepas fueron sensibles a TO, AK e IMI.
Conclusiones 1) Se observa una prevalencia elevada <strong>de</strong> resistencia a betalactámicos, incluyendo al AMC para E.coli, que por otra parte constituye el 72 % <strong>de</strong> las ITU hospitalarias. 2) La FO podría ser una buena alternativa por su bajo nivel <strong>de</strong> resistencia para E.coli. 3) El CP no es una buena opción como tratamiento empírico en ITU hospitalaria por su alto porcentaje <strong>de</strong> resistencia y la posibilidad <strong>de</strong> aparición <strong>de</strong> cepas resistentes a otra quinolonas, principalmente LVX.4) La AMX sigue siendo efectiva para la ITU por enterococo. 5) Los carbapenemes (IMI) serían una buena alternativa en casos <strong>de</strong> riesgo <strong>de</strong> infección por P.aeruginosa. 061 DETECCIÓN LEGIONELLA EN AGUAS MEDIANTE CULTIVO Y PCR A ”TIEMPO REAL” OCETE MOCHÓN, M.; LLUCIÁN RAMBLA, R.; ALFONSO SÁNCHEZ, J.; MARCAIDA BENITO, G.; SÁEZ TORMO, G.; DONDERIS TORRENS, S.; Centro <strong>de</strong> Diagnostico Biomédico. Servicio Anális - Valencia Objetivo: Comparar los resultados obtenidos con dos <strong>de</strong> los métodos disponibles para la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> Legionella spp. en muestras <strong>de</strong> agua. El cultivo, consi<strong>de</strong>rado como método <strong>de</strong> referencia y la PCR a “tiempo real” (PCR-RT). Material Y Métodos: Se analizan 140 muestras <strong>de</strong> agua proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> la red <strong>de</strong> distribución <strong>de</strong> agua sanitaria (caliente y fría) mediante: 1.Cultivo: según el procedimiento <strong>de</strong> trabajo <strong>de</strong>scrito en la Norma UNE-ISO 11731:1998. Demuestra la presencia o ausencia <strong>de</strong> Legionella y estima el nº <strong>de</strong> unida<strong>de</strong>s formadoras <strong>de</strong> colonias (ufc) en un volumen <strong>de</strong> muestra original. 2.PCR –RT para la amplificación <strong>de</strong> un fragmento específico <strong>de</strong>l genoma <strong>de</strong> la bacteria. Se efectúa en las siguientes fases: Concentración <strong>de</strong> las muestras <strong>de</strong> agua por filtración, lisis bacteriana, extracción y purificación <strong>de</strong> los ácidos nucleicos (“High Pure Template Preparation Kit (Roche®), <strong>de</strong>tección y cuantificación <strong>de</strong> Legionella mediante LightCycler 2.0 (Roche®) utilizando para la mezcla <strong>de</strong> reacción el kit LightCycler Fast-Sart DNA Master Plus Hybridization Probes (Roche®) y un control interno <strong>de</strong> inhibición (Light Cycler Control Kit DNA (Roche®). Se utilizan cebadores que amplifican un fragmento <strong>de</strong> 386-pb <strong>de</strong>l gen 16S rRNA <strong>de</strong> Legionella. Los productos <strong>de</strong> amplificación se <strong>de</strong>tectan mediante el empleo <strong>de</strong> sondas <strong>de</strong> hibridación marcadas por fluorocromos. Los resultados se expresan nºcopias DNA/Litro. Análisis estadístico: mediante el test Chi-Cuadrado para los resultados cualitativos y regresión lineal para cuantitativos Resultados De las 142 muestras <strong>de</strong> aguas analizadas el resultado <strong>de</strong>l análisis fue positivo en 42 (30%) <strong>de</strong> los cultivos y en 54 (38.57%) por PCR-RT. Existe asociación, estadísticamente significativa (p
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