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6 Conclusiones - La respuesta de los AGAII IgA es similar a la de los marcadores EMA y tTG, siendo un marcador de interés en el estudio de EC, mientras que AGAII IgG muestra un grado de acuerdo menor - En niños menores de 3 años AGAII IgA parecen comportarse con una mayor sensibilidad que los otros marcadores - Es necesario seguir la evolución de los pacientes en los que se ha encontrado discrepancias con EMA y tTG 017 ANÁLISIS COMPARATIVO DE TRES MÉTODOS DE ELISA FRENTE A INMUNODOT PARA LA DETERMINACIÓN DE ENAS LÓPEZ RIQUELME, N.; DOSDA GONZÁLEZ, M.; RAMÍREZ GARRIDO, F.; NOGUERA MOYA, O.; ESPASA SEMPERE, A.; CAÑAS BELLO, D.; Servicio Análisis Clínicos, H.G.U. Elche - Elche (ALicante) Introducción: Los procesos autoinmunes pueden afectar diversos órganos y los autoanticuerpos que aparecen en ellos presentan diversas especificidades. Los procedimientos técnicos para detectarlos están condicionados por la forma disponible del Ag (purificado o no) y/o la facilidad y sensibilidad deseadas para su detección. Los anticuerpos antinucleares (ANA) son autoanticuerpos dirigidos contra una gran variedad de estructuras intranucleares (DNA, RNA...). La investigación de los ANA es un prueba de cribado esencial para el diagnóstico de LES y de otras conectivopatías. Dentro de este grupo de anticuerpos encontramos los ENAS que son anticuerpos dirigidos contra proteínas nucleares no histonas que pueden extraerse del núcleo con soluciones salinas de baja fuerza iónica. Los más estudiados son los dirigidos contra los antígenos SSb (La), Ssa (Ro), RNP, Sm, Scl-70 y Jo-1. Objetivo Determinar el grado de correlación de los resultados obtenidos mediante una técnica de inmunodot con varias técnicas de ELISA. Materiales Y Métodos Se determinaron los ENAS (Ro, La, Sm-RNP, Sm, Scl-70 y Jo-1), por 3 métodos de ELISA, a 36 muestras de suero que dieron positivas para alguno de ellos por el ensayo inmunodot de la casa “Generis Assays “. Este inmunodot determina la presencia de los ENAS en una tira que contiene los antígenos específicos para cada uno de ellos (antígenos de origen bovino para La, Sm, Sm-RNP, Jo-1 y Scl-70 y antígenos humanos recombinantes para el Ro). Los métodos de ELISA que se usaron fueron: - ELISA de la casa Phadia automatizado en un InmunoCap 250 que usa antígenos humanos recombinantes para la determinación de La, Ro, Scl-70, Jo-1 y Sm-RNP, y antígenos nativos de origen bovino para la determinación de Sm. - ELISA de Orgentec Diagnostika GmbH automatizado en el Labotec que utiliza antígenos altamente purificados nativos de Sm-RNP, Scl-70, Jo-1 Ro y Sm y antígenos recombinantes humanos para el La. - ELISA monotest de Orgentec Diagnostika GmbH automatizado en el ALEGRIA. Resultados Por el método de Inmunodot se obtuvo un 44% de concordancia con el ELISA realizado en el labotec, un 50% con el ELISA realizado en el ALEGRIA y un 39% con el ELISA realizado en el InmunoCap. Las concordancias entre los distintos ELISAS fueron: ELISA Orgentec por Labotec con el realizado por el Alegría un 88.8%. ELISA realizado por el Alegria con el de Phadia un 77.7%. ELISA realizado por el Labotec con el de Phadia un 75%. Conclusiones Todos estos resultados habría que analizarlos junto con la clínica del paciente para tratar de encontrar cual de las 4 técnicas es más adecuada para cada ENA en particular, ya que dependiendo del tipo de antígeno que se use para detectar cada uno de estos anticuerpos variar la sensibilidad y especificidad de las técnicas. 018 ANTICUERPOS ANTITRANSGLUTAMINASA IGA EN LA EVALUACION DE LA EFICACIA DE LA DIETA SIN GLUTEN EN ENFERMEDAD CELIACA LLORENTE ALONSO, M.; SEBASTIAN PLANAS, M.; VILLANUEVA CURTO, S.; GARCIA GARCIA-LESCUM, C.; AGUIRREGOICOA GARCIA, E.; CRIADO GOMEZ, L.; Hospital De Mostoles - Mostoles La enfermedad celiaca (EC) es una intolerancia permanente al gluten que afecta a individuos genéticamente predispuestos. Cursa con atrofia severa de intestino delgado. El único tratamiento eficaz es una dieta sin gluten (DSG) de por vida, que conduce a la desaparición de síntomas clínicos, y a la normalización del nivel de anticuerpos circulantes y de la lesión intestinal. Nuestro objetivo es analizar la validez de los anticuerpos antitransglutaminasa como marcador indirecto de la respuesta a (DSG) y la evolucion de la hipertransaminasemia (HT) y ferropenia detectadas al diagnostico. Población de estudio y métodos. Se analizan 164 pacientes en DSG procedentes de nuestra área , de los cuales 129 eran niños (83 niñas, 46 niños) y 35 adultos (28 mujeres, 7 varones). El tiempo medio de seguimiento fue de 1 año (0,3-6,3). Se excluyen los casos con déficit de IgA. La valoración de anticuerpos antitransglutaminasa isotipo IgA (tTGA) se realizó utilizando anticuerpo recombinante humano (Pharmacia). Resultados El nivel serico de tTGA declina rapidamente tras DSG. El 77,4% de los celiacos mostraron valores normales de tTGA, 19,7% mostraron valores en zona gris y 7,9% presentaron valores moderadamente altos de tTGA. Estos datos son concordantes con los descritos en la literatura. Se realizaron 26 biopsias intestinales (BI) de control de DSG. En 25 casos existió concordancia entre los hallazgos histológicos y nivel de tTGA. En 3 casos se detecto atrofia vellositaria y elevación de tTGA, 1 caso mostro ligera atrofia y la tTGA se situaba en zona gris, y en 21 casos la BI y tTGA eran normales. En 5 pacientes se documentaron por el clínico pequeñas trasgresiones dietéticas, 4 de ellos mostraron valores altos de tTGA y 1 en zona gris. El seguimiento de la DSG se realizó regularmente en los casos pediátricos, mientras que el 40% de los adultos carece de control serologico de 1 a 6 años. Tras la DSG, se observa una disminución significativa de la HT(p
evaluar. Dichos datos fueron obtenidos con los métodos habituales del laboratorio (inmunofluorescencia indirecta, contrainmunoelectroforesis y ELISA). La utilización de dicha seroteca permitió confirmar la detección de las especificidades declaradas por el fabricante del equipo ANA Detect alegria. De este modo, podemos concluir que el uso de dicho kit en su utilización como equipo orientado al analizador alegria, cumple las espectativas como método automatizable con un elevado grado de sensibilidad para el cribaje de ANAs. 021 UTILIDAD DEL EQUIPO ANTI-TRANSGLUTAMINASA IGA+G ORGENTEC EN EL DIAGNÓSTICO DE LA ENFERMEDAD CELÍACA MANZANERO IGLESIAS, J.; GARCÍA FERNÁNDEZ, J.; Palex Medical, SA - Barcelona El objeto del presente estudio es valorar como alternativa en el screening de Enfermedad Celíaca (EC) el kit anti-transglutaminasa tisular (anti-tTG) IgA+G, que detecta simultáneamente anticuerpos anti-IgA e IgG. La ausencia de anticuerpos antitTG de tipo IgA en un estudio de screening sólo es definitiva si el paciente no presenta deficiencia constitutiva de inmunoglobulinas de tipo IgA. Está descrito que la Deficiencia Selectiva (DS) de IgA es la más común de las enfermedades de inmunodeficiencia primaria. La DS de IgA es difícil de descubrir pues por sí sola no suele presentar síntomas clínicos. Un screening de EC mediante detección de anticuerpos anti-tTG de tipo IgA debería de ir acompañado de un estudio de Inmunoglobulinas para descartar la ausencia de DS de IgA. En este trabajo se utilizó un grupo de 155 muestras pertenecientes a tres grupos diferentes: Sueros de Banco de Sangre, Sueros de Pacientes con Enfermedad Inflamatoria Intestinal (EII)y Sueros de Pacientes con EC. El análisis de las muestras fue realizado con los equipos de enzimoinmunoensayo ELISA (Orgentec GmbH, Alemania) para la detección cuantitativa de los anticuerpos anti-transglutaminasa tisular (anti-tTG): Anti-tTG IgA+G (anticuerpos de tipo IgG e IgA), Anti-tTG IgA y Anti-tTG IgG. El procedimiento analítico de los tres kits fue realizado con el analizador alegria. Se realizó con todas las muestras el análisis por Inmunofluorescencia indirecta sobre esófago distal de mono (Orgentec GmbH), para la detección de anticuerpos antiendomisio (EMA) de tipo IgA. Los resultados confirman que la detección de anticuerpos anti-tTG de tipo IgG e IgA simultáneamente es un sistema adecuado para el screening de EC. El riesgo de no disponer de los datos de una DS de IgA no es importante en centros hospitalarios, donde los estudios inmunológicos suelen ir acompañados del análisis de los perfiles de inmunoglobulinas. No obstante, no siempre se disponen de estos datos adicionales para llevar a cabo el diagnóstico clínico en paralelo con el estudio serológico. Esta situación es especialmente común en los laboratorios o centros de análisis privados. La necesidad de pruebas diagnósticas adicionales, habituales en el entorno hospitalario, son imposibles en estos casos, además de suponer costes adicionales no previstos. Desde este punto de vista, es el laboratorio privado (o cuando no se disponga de pruebas adicionales) donde el estudio parece recomendar el screening de EC con el kit anti-tTG IgA+G. 022 ESTUDIO COMPARATIVO ENTRE UN MÉTODO DE ENZIMOINMUNOENSAYO Y UN MÉTODO DE INMUNOBLOT PARA LA DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS ANTIGLIADINA IgA Y TRANSGLUTAMINAS MIRALLES DOLZ, F.; CALATAYUD FERRE, O.; PLA PEREZ, S.; GARCÍA ÚBEDA, I.; CASTELLS PIERA, X.; OCHOA ÁVILA, E.; Hospital Lluís Alcanyís - Xàtiva Introducción. Se evalúa un método de Inmunoblot comparándolo con un método de enzimoinmunoensayo (tomado como método de referencia) con objeto de evaluar el primer método para poderlo aplicar en laboratorios primarios con escasa demanda (no disponen de autoanalizador) como prueba de despistaje para el diagnóstico de Celiaquía. Material Y Métodos. Las muestras a analizar se obtienen tras centrifugación y almacenamiento del suero a -20 grados C hasta en momento de su procesamiento por ambos métodos.El método de enzimoinmunoensayo se efectúa en el analizador automático ALEGRIA de ORGENTEC. El método a evaluar está desarrollado en tiras para Inmunoblot. Los reactivos de ambos métodos vienen suministrados por Palex médica. Resultados. Los valores obtenidos muestran las siguientes características: Anticuerpos antigliadina: Sensibilidad= 0,8. Especificidad= 0,91. VPP= 0,89. VPN= 0,83 Test exacto de Fisher, p= 4,7x10E-6 Anticuerpos antitransglutaminasa: Sensibilidad= 0,96. Especificidad= 1. VPP= 1. VPN= 0,95 Test exacto de Fisher, p= 4,5x10E-11 Conclusiones. 1. El Test exacto de Fisher relata una buena asociación entre las dos técnicas. 2. Los valores de sensibilidad, especificidad, VPP y VPN son buenos en todos los casos, especialmente en es estudio de los anticuerpos contra la transglutaminasa. 3. El Inmunoblot es una buena técnica de despistaje, particularmente si se confirman los resultados cuando uno de los dos métodos de positivo. I Congreso Nacional del Laboratório Clínico – Sevilla, 17/20 Octubre 2007 023 ESTUDIO COMPARATIVO ENTRE UN MÉTODO DE ENZIMOINMUNOENSAYO Y UN MÉTODO DE INMUNOBLOT PARA LA DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS ANTIGLIADINA IgA Y ANTICUERPOS ANTITRANSGLUTAMINASA MIRALLES DOLZ, F.; CALATAYUD FERRE, O.; PLA PÉREZ, S.; GARCÍA ÚBEDA, I.; CASTELLS PIERA, X.; OCHOA ÁVILA, E.; Hospital Lluís Alcanyís - Xativa Introducción: Se evalúa un método de Inmunoblot, comparándolo con un método de enzimoinmunoensayo (tomado como método de referencia), con objeto de implementarlo en un laboratorio primario con escasa demanda como prueba de cribaje para el diagnóstico de Celiaquía. Material Y Métodos: Las muestras a analizar se obtienen por punción venosa y tras su centrifugación se procede al almacenamiento del suero a -20 grados C hasta en momento de su procesamiento. La evaluación se realiza en 42 muestras: 20 positivas y 22 negativas para anticuerpos antigliadina (AAG) y 23 positivas y 19 negativas para anticuerpos antitransglutaminasa (AAT) por el método de enzimoinmunoensayo. El ensayo del método de enzimoinmunoensayo se realiza de modo automático en el analizador ALEGRIA de ORGENTEC. El examen del método a evaluar se efectúa de manera manual en tiras para Inmunoblot. Ambos reactivos vienen suministrados por Palex médica. Resultados: Los valores obtenidos muestran las siguientes características: AAG: Coeficiente nominal Phi y V de Cramer 0,716, p= 3,5x10E-6 Sensibilidad= 0,8. Especificidad= 0,91 VPP= 0,89. VPN= 0,83 AAT: Coeficiente nominal Phi y V de Cramer 0,953, p= 6,5x10E-10 Sensibilidad= 0,96. Especificidad= 1 VPP= 1. VPN= 0,95 Conclusiones: 1. El Coeficiente nominal Phi y la V de Cramer relatan una buena asociación entre las dos técnicas. 2. Los valores de sensibilidad, especificidad, VPP y VPN son buenos en todos los casos, especialmente en el estudio de los AAT. 3. El Inmunoblot es una buena técnica de cribaje, particularmente si se confirman los resultados cuando una de las dos pruebas de un resultado positivo. 024 ANTICUERPOS ANTI-CARDIOLIPINAS. ESTUDIO COMPARATIVO MORAIS FERREIRA, P.; GARCIA BERROCAL, B.; APARICIO HERNANDEZ, B.; GONZALEZ MENDIA, I.; GONZALEZ DE BUITRAGO, J.; NAVAJO GALINDO, J.; Hospital Universitario Salamanca - Salamanca Introducción: Los anticuerpos anti-cardiolipinas (ACA) pertenecen al grupo de anticuerpos antifosfolipídico (aPL). Su presencia se relaciona con algunas enfermedades autoinmunes (principalmente en el lupus eritematoso sistémico), infecciones, neoplasias y en otras enfermedades sistémicas. En la clínica habitual es fundamental la determinación de estos anticuerpos, tipo IgG e IgM, para el diagnóstico del síndrome antifosfolipídico. OBJETIVOS: Análisis comparativo mediante los kits comerciales EIA Varelisa Cardiolipin IgG, IgM, de Phadia y QUANTA Lite ACA IgG, IgM, de Inova para la determinación de estos anticuerpos mediante enzimoinmunoensayo (ELISA). Materiales Y Métodos: Se incluyeron un total de 41 muestras de pacientes procedentes de diferentes áreas clínicas de nuestro hospital. Ambos ensayos se realizaron en el analizador Zennit de Menarini bajo las mismas condiciones de reproductibilidad. Para el análisis de los datos se utilizó el programa estadístico SSPS 14. Resultados: El estudio estadístico mostró una correlación significativa, con un coeficiente de correlación de 0,731 y un nivel de significación menor de 0,01 entre los ACA IgG de ambos kits con una recta de regresión: Y= 1,593 + 0,780*X. Igualmente, se obtuvo una correlación estadísticamente significativa entre los ACA IgM de ambos kits, con un coeficiente de correlación de 0,548 y un nivel de significación menor de 0,01, mostrando la recta de regresión: Y= 3,799 + 0,217*X. Conclusiones: Los resultados obtenidos muestran que existe una buena correlación entre ambos métodos analíticos para la determinación de anticuerpos anticardiolipinas, aunque debido a la falta de consenso inter-laboratorios en la medición de estos anticuerpos nos hemos planteado realizar un estudio más completo a fin de comprobar la estabilidad de los kits en el tiempo. 7
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