resúmenes de ponencias - Asociación Española de Biopatología ...

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ANÁLISIS DEL GEN PLP EN PACIENTES CON SINTOMAS DE LA
ENFERMEDAD DE PELIZAEUS-MERZBACHER
MUÑOZ CALERO, M.; VALCÁRCEL PIEDRA, G.; RIDRUEJO GUTIERREZ, M.;
MOLANO MATEOS, J.;
Hospital Universitario La Paz - Madrid
Objetivos:La enfermedad de Pelizaeus-Merzbacher (PMD) constituye una “rara”
leucodistrofia hereditaria secundaria a una deficiencia en la proteolipoproteína (Plp)
con un patrón recesivo ligado al cromosoma X. Tiene una prevalencia aproximada de
un caso cada 500.000.La enfermedad cursa con una severa hipomielinización
estrictamente limitada al sistema nervioso central (SNC). Se definen dos subtipos: la
forma connatal (tipo II) y la clásica (tipo I) que se diferencian tanto en el grado de
afectación, en la progresión y en la supervivencia del paciente siendo la primera la
forma más grave.
La proteolipoproteina (PLP) supone el 50% de las proteínas totales de la vaina de
mielina del SNC (sin embargo esta proteína sólo se encuentra en un 1% en el sistema
nervioso periférico).La función de esta proteína es contribuir al desarrollo de los
oligodendrocitos y al mantenimiento de la integridad axonal. El gen que codifica esta
proteína se encuentra en el cromosoma X (Xq21.3-q22). La Plp humana posee 276
aminoácidos con cinco dominios hidrófobos y se conserva invariable en las distintas
especies.
Pacientes y Métodos:La selección de pacientes se ha hecho en función a si poseen
síntomas y signos sugestivos de padecer la enfermedad habiendo descartado
previamente otras patologías. Estos signos serían:1-Nistagmus de comienzo precoz.
2-En algunos casos estridor laringeo.3-Hipomielinización grave diagnosticada por
RMN.4-Hallazgos neurofisiologicos periféricos normales (EMG y VCN). Se analizó
la posible duplicación del gen PLP mediante cuantificación de los cocientes
PLP4/CFTR4 y PLP2/CFTR4. Se confirmó el resultado con la técnica de "Multiplex
Ligation Probe Amplification" (MLPA). Se secuenció cada uno de los exones del gen
PLP en aquellos casos que no presentaron duplicación (o delecion de gran tamaño).
Resultados:Se han analizado el gen PLP en 30 pacientes varones con síntomas
sugestivos de padecer PMD. Ocho pacientes eran portadores de una mutación en el
gen PLP: 6 eran portadores de una duplicación del gen; dos pacientes mostraron
deleción de regiones del gen (uno de ellos una delecion de 3 pb en el exon 3; el otro
una deleción de gran tamaño que se extiende desde al menos 5 Kb por delante del
extremo 5’ del gen y que alcanza hasta el intron 4). De los 8 pacientes positivos para
mutaciones en el gen PLP, 2 eran casos esporádicos (la mutación era “de novo”) y en
5 casos la madre del paciente era portadora de la mutación. En un caso no se dispuso
de muestra materna para el analisis.
Conclusiones:Teniendo en cuenta la prevalencia de PMD (estimada en 1 en 500000),
en esta comunicación se presenta el analisis genético de 8 de los aproximadamente 45
casos estimados para la población española. Anteriormente se habian descrito otros 3
casos en España. Nuestros resultados coinciden con resultados descritos
anteriormente en la bibliografía.
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FARMACOGENÉTICA EN PSIQUIATRIA: TEST AmpliChip CYP450
GARCÍA-MOLINA SÁEZ, E.; NUÑEZ RAMOS, R.; GARCÍA SALAS, J.; SÁNCHEZ
DE LA MATA, M.; TOVAR ZAPATA, I.; CAÑIZARES HERNÁNDEZ, F.; CABEZAS
HERRERA, J.; MARTÍNEZ HERNÁNDEZ, P.; RUIZ ESPEJO, F.;
HOSPITAL UNIVERSITARIO VIRGEN DE LA ARRIXACA - EL PALMAR
Objetivos: El nombre de citocromo P450 (CYP450) se emplea para designar una
superfamilia de proteínas microsomales implicadas en el metabolismo de distintas
clases de fármacos y agentes xenobióticos. Además, son las enzimas más importantes
de cara a la metabolización de drogas en fase I. El CYP450 y sus variantes,
particularmente CYP2D6 y CYP2C19, son responsables del metabolismo de un buen
número de fármacos de amplia prescripción; antidepresivos, antisicóticos, etc.
Actualmente, en el H.U Virgen de la Arrixaca, se está realizando un estudio
farmacogenético con el test AmpliChip CYP450 en pacientes psicóticos. El ensayo
está previsto para ayudar a individualizar el tratamiento más adecuado y el ajuste de
su dosis con agentes terapéuticos metabolizados principalmente por estas enzimas.
Materiales y Métodos: La prueba AmpliChip CYP450 es el primer test
farmacogenético para uso diagnóstico (desarrollado por Roche Molecular Systems
con tecnología microarray de Affimetrix), aprobado por la FDA (Food and Drug
Administration) de EEUU en el 2004. Este test tipifica dos genes polimórficos, el
CYP2D6 y el CYP2C19 y proporciona una predicción fenotípica de las actividades
enzimáticas asociadas. El ensayo detecta 29 polimorfismos conocidos del gen
CYP2D6, que incluyen duplicación y deleción génica, y dos polimorfismos
principales del CYP2C19. El CYP2D6 que cuenta con al menos 100 variantes
alélicas pueden ser expresadas principalmente en cuatro fenotipos; metabolizadores
deficientes (MDs), intermedios (MIs), eficientes (MEs) y ultrarrápidos (MUs). El
CYP2C19 presenta dos fenotipos principales: MEs y MDs. Hasta la fecha, en nuestro
hospital se han genotipado y fenotipado a 72 pacientes psicóticos.
Resultados: Las variantes y frecuencias alélicas (%) obtenidas para el CYP2D6
fueron similares a otros estudios realizados en poblaciones caucasianas: *1(32.6),
*2(13.9), *3(2.1), *4(20.8), *5(3.5), *9(3.5), *10(2.8), *17(0.7), *35(5.6), *41(13.2)
y 2XN(1.4). Sus fenotipos metabolizadores (%): MDs (7), MIs (12.5), MES (80.5) y
MUs (0). Respecto a las variantes génicas y fenotipos del CYP2C19: *1(81.9),
*2(18.1) y MDs (8.3).
Conclusiones: Se ha genotipado y fenotipado los genes CYP2D6 y 2C19 en un
número importante de pacientes psicóticos con la finalidad de hacer un seguimiento
principalmente en aquellos que presentasen fenotipos extremos. Tales medidas
deberían mejorar la respuesta del paciente al reducir posibles reacciones adversas y
optimizar la eficacia del fármaco.
I Congreso Nacional del Laboratório Clínico – Sevilla, 17/20 Octubre 2007
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DETECCIÓN DE LEGIONELLA PNEUMOPHILA VIABLE MEDIANTE
AMPLIFICACIÓN DE RNA POR PCR
OCETE MOCHÓN, M.; ESPINOSA IBAÑEZ, O.; DASÍ FERNÁNDEZ, F.; LLUCIÁN
RAMBLA, R.; DONDERIS TORRENS, S.; SÁEZ TORMO, G.;
Centro De Diagnóstico Biomédico, Servicio Análi - Valencia
Objetivo
Descripción de una método de análisis mediante PCR para la detección de Legionella
pneumophila viable, mediante amplificación del gen mip a partir células bacterianas
vivas y muertas.
Material y Métodos
Cepa de trabajo: Legionella pneumpohila subespecie pneumpophila (cepa Brenner
1977) (CECT 7109)
Medio de cultivo: medio de Legionella líquido preparado en el laboratorio (Bej,
Mahbubani and Atlas, 1991)
Procedimiento de trabajo: Partimos de 100 mL cultivo líquido de Legionella (CECT
7109) en fase de crecimiento logarítmico (incubación 18 horas / 37ºC), muestra A. 50
mL del cultivo anterior se expone a situación letal 100ºC/2 horas, muestra B. Una
alícuota (100 µL) de cada cultivo (A y B) se inocula en medio específico de
Legionella (BCYE) para detectar la viabilidad o no de las células.
Se realiza extracción de RNA a partir de 15 mL de los cultivos A y B (método de
extracción guanidino/tiocianato/fenol/cloroformo, Chomczynski and Sacchi, 1987).
Del RNA extraído de ambas muestras se realiza retrotranscripción a cDNA (Ready-
To-Go You-Prime First-Strand Beads, Amsersham Biosciences®). El cDNA se
amplifica mediante PCR en LigthCycler 2.0 (Roche®) utilizando los cebadores
Lmip920 y LmipR1548 (Bej, Mahbubani and Atlas, 1991) y para la mezcla de
reacción se emplea el kit LigthCycler Fast-Start DNA Master Plus Hibridization
Probes (Roche®). La visualización de los amplificados se realiza mediante
electroforesis en gel de agarosa.
Resultados
Muestra A. se demuestra mediante cultivo la existencia de bacterias viables,
obteniéndose crecimiento de más 1000 ufc/µL de de Legionella pneumophila,
confirmado por sero-aglutinación con látex (Oxoid®).
Muestra B. Ausencia de crecimiento.
El análisis del amplificado cDNA: en la muestra A se observa la presencia de un
fragmento de 650pb que migra de igual forma que el marcador de RNAm y una
banda debil que migra como el marcador de RNAr. La muestra B: no presenta la
banda correspondiente al RNAm y se observa una banda débil, igual a la de la
muestra A, de RNAr.
Conclusiones
Los resultados preliminares de este ensayo sugieren que el método de trabajo
desarrollado puede ser útil para la detección de Legionella pneumophila viable.
Estudios posteriores se deben realizar para su aplicación en los análisis de muestra de
agua sanitaria.
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DISTRIBUCIÓN GENOTÍPICA DEL POLIMORFISMO -1131T>C DEL
GEN DE LA APOLIPOPROTEÍNA A5 (APOA5) Y CONCENTRACIONES DE
LÍPIDOS EN PACIENTES ISQUÉMICOS
OLIVEIRA SOUSA, M.; ALÍA RAMOS, P.; PINTÓ SALA, X.; CORBELLA INGLES,
E.; NAVARRO MORENO, M.;
Laboratorio de Bioquímica Hormonal y Génica Y Un - Barcelona
Diversos estudios han mostrado que algunos polimorfismos en el complejo génico
A1-C3-A4-A5 del cromosoma 11 (región q23) determinan variaciones en los niveles
de los lípidos plasmáticos. El polimorfismo -1131T>C de la region promotora del gen
APOA5 se ha descrito en varias poblaciones con distintas frecuencias y se ha
asociado con la elevación de las concentraciones de los triglicéridos y con el aumento
del riesgo de enfermedades cardiovasculares.
El objetivo del estudio fue determinar las frecuencias genotípicas del polimorfismo -
1131T>C del gen APOA5 en pacientes isquémicos del Programa de Prevención
Secundaria del Hospital de Bellvitge, y relacionarlas con algunas de sus
características clínicas y concentraciones lipídicas.
Se seleccionaron 241 pacientes (86% hombres) de edades entre 30 y 79 años, que
habían padecido algún episodio isquémico agudo. En su primera visita, el 71% ya
seguía un tratamiento hipolipemiante. Se analizaron: colesterol, triglicéridos, c-HDL,
c-LDL, ApoA1, ApoB y características tales como índice de masa corporal (IMC),
tabaquismo, sedentarismo, consumo de alcohol, hipertensión y diabetes/intolerancia a
la glucosa. Los pacientes fueron genotipados para APOA5 por PCR seguida de
digestión con la enzima de restricción MseI y agrupados como portadores C (TC y
CC) y no portadores C (TT).
Las frecuencias genotípicas fueron: TT 84,7%, TC 14,1% y CC 1,2%. La frecuencia
de alelo C fue 8,3%. No se observaron diferencias significativas entre portadores y no
portadores de C en cuanto a sexo, edad, IMC, sedentarismo, tabaquismo, consumo de
alcohol, hipertensión y tipo de isquémia. Sin embargo, se observó una mayor
frecuencia de portadores C entre los pacientes con diabetes/intolerancia a la glucosa
(p= 0,047). No había diferencias significativas en las medias de las concentraciones
de los lípidos ni en la primera visita ni tras un año de tratamiento; pero en los
pacientes que no llevaban un tratamiento hipolipemiante previo se observaron valores
iniciales inferiores de cHDL (p=0,03) y ApoA1 (p=0,02) en el grupo portador de C.
En este estudio se observó que la frecuencia del alelo C entre los pacientes
isquémicos es similar a la descrita para la poblacion caucasiana en general. La
variante -1131C del gen APOA5 se da con mayor frecuencia entre los pacientes
isquémicos con diabetes/intolerancia a la glucosa. No se ha observado la influencia
del polimorfismo -1131T>C sobre las concentraciones de TG en esta población de
pacientes isquémicos.