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68 262 DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA GLICOSILADA A1c: HA 8140 vs HA 8160 BOUZA BOUZA, S.; BERRUETE MARTÍNEZ, M.; RUIZ ECHARRI, B.; MARTÍN RODRÍGUEZ, E.; GRIJALBA UCHE, A.; ABAD VICENTE, J.; Hospital De Navarra - Pamplona Introducción: La HbA1c (hemoglobina glicosilada A1c), es la determinación habitual en el control a largo plazo de la diabetes. Valora los 2 o 3 meses anteriores de tratamiento. Ante la puesta en marcha de un nuevo analizador de HbA1c, pretendemos valorar la necesidad de modificar los valores de referencia actuales. Valor de referencia en nuestro hospital: 4.1-6.2%. Objetivo: Estudiar la concordancia de la medición de HbA1c entre los analizadores HA8140 y HA8160. Material Y Métodos: Muestras: sangre total-EDTA de 100 pacientes solicitadas por las Consultas de Endocrinología y Medicina Interna recogidas aleatoriamente. Analizadores: HA8140 (Menarini Diagnostics SA): Técnica HPLC. Determinaciones: HbA1c, HbA1, HbF (hemoglobina fetal), detección de variantes de hemoglobina. Tipo de muestra: sangre total o hemolizada. Tiempo de análisis: 4 minutos/test. HA8160 (Menarini Diagnostics SA): Técnica HPLC. Determinación de hemoglobina, capaz de trabajar con un protocolo para monitorizar la diabetes (HbA1c) y otro para screening de ß-talasemias (HbA2), determinando en ambos casos variantes de hemoglobina. Tipo de muestra: sangre total o hemolizada. Tiempo de análisis: 2.9 minutos/test en modo diabetes y 4.2 minutos en modo diabetes y screening de talasemia. Estadística: Test exploratorio de normalidad de Kolmogorov-Smirnov. Test de U de Mann-Whitney no paramétrico para dos muestras independientes. Estudio de regresión y método de Bland-Altman. Resultados: El test de Kolmogorov-Smirnov, indica que los datos siguen una distribución no paramétrica. El test de U de Mann-Whitney demuestra que no hay diferencias significativas (p
Metabolitos En los 10 equipos los rangos fueron: • Glu: r=0,97-1, a=0,969-1,143 y b=-4,559- 5,779; • Lac: r=0,88-1, a=0,948-1,07 y b=-0,079-0,174 Hemoglobina y fracciones En los 14 equipos los rangos fueron: • Hb: r=0,83-1, a=0,909-1,084 y b=-1,064- 1,255; • FO2Hb: r=0,97-1, a=0,92-1,016 y b=-1,629-7,84; • FCOHb: r=0,7-0,99, a=0,625-1 y b=-0,245-0,65; • FHHb: r=0,97-1, a=0,924-1,016 y b=-0,265-0,394; • FMetHb: r=0,7-1, a=1-2,667 y b=-0,143-0,65. Conclusiones Este estudio permite concluir que los 15 analizadores evaluados presentan características adecuadas para proceder a su implantación en ubicaciones periféricas como analizadores POCT en todos los parámetros analizados 266 INTRODUCCIÓN DE UN PROTOCOLO DE EXTRACCION DE CORTISOL EN ORINA CASTAÑEDA SAN CIRILO, M.; NIETO SANCHEZ, C.; RUIZ COSANO, J.; ALCOVER SAEZ, S.; MARTINEZ GASCON, L.; VIVERO BOLEA, G.; Hospital Santa M.Del Rosell - Cartagena Objetivos: La determinación del cortisol libre urinario medido en 24 horas es el método óptimo para la detección del síndrome de Cushing, ya que obvia la variación circadiana que si afecta al cortisol en suero. Al introducir en nuestro laboratorio la determinación del cortisol libre urinario, nos planteamos estudiar si los resultados obtenidos eran comparables con los del laboratorio externo, que hasta ese momento realizaba la medición de ésta magnitud . Materiales y métodos: Se analizaron 69 orinas de 24 horas procedentes de nuestra Área de Salud. Una alícuota se envió al laboratorio externo y otra se congeló hasta su procesamiento en nuestro laboratorio. La extracción del cortisol se realizó siguiendo el protocolo recomendado por nuestro fabricante ( extracción con CH2Cl2 en proporción 1:5, 1,5 ml del extracto orgánico se evaporó a sequedad y el residuo fue reconstituido con diluyente ). La determinación del cortisol libre urinario se determinó mediante enzimoinmunoensayo quimioluminiscente en el autoanalizador Elecsys 2010 ( Roche). Como control de calidad se utilizó Lyphocheck Quantitative Urine Control nivel 1, de Biorad, el cual se procesó como una muestra más. Todas las muestras se procesaron por duplicado. Resultados: Los resultados del control de calidad de cortisol libre urinario estaban dentro de los márgenes establecidos por el fabricante y se obtuvo un CV del 5,67%. En el estudio de la precisión, la diferencia observada entre las dos parejas no superó en ningún caso el 16%. Para la comparación de los dos métodos se utilizó el test no paramétrico de Passing- Bablock, para el cual se obtuvo la ecuación: y = -10,996 + 0.773x ( x = laboratorio externo, y = Elecsys ). Los intervalos de confianza con un 95% de seguridad fueron para la ordenada en el origen ( -42,296 – 2.903 ) y para la pendiente ( 0,551-1,209 ) Conclusiones: Según los coeficientes de la ecuación de Passing-Bablock y sus respectivos intervalos de confianza podemos concluir que no hay diferencias constantes ni proporcionales y por lo tanto son métodos comparables. Los coeficientes de variación obtenidos para las parejas de muestras nos parecen aceptables, teniendo en cuenta el elevado componente manual que tiene el método y por lo tanto su gran variabilidad. 267 ESTUDIO DE CÉLULAS PROGENITORAS EN SANGRE PERIFÉRICA POR CITOMETRÍA DE FLUJO. CASTILLO ROBLEDA, A.; MAGAÑA SANCHEZ, A.; ATANCE GOZALO, M.; PEREZ RODRIGUEZ, D.; VALDEMORO GONZALEZ, M.; DEL CASTILLO CUERVO-ARANGO, L.; Hospital Niño Jesús - Madrid Introducción El uso de progenitores hematopoyéticos de sangre periférica como alternativa a la médula ósea, ha aumentado en los últimos años. La principal ventaja es una recuperación hematológica más rápida, seguramente debida a la mayor infusión de progenitores . La aplicación de la Citometría de flujo, permite caracterizar de forma rápida y precisa estas poblaciones. La cuantificación de células que expresen CD34 permite estimar el nº de progenitores hematopoyéticos(PH) de un producto celular para trasplante, de una forma rápida y específica. Material Y Metodos Se realiza estudio descriptivo, donde se evaluan los resultados de las leucoaféresis realizadas en el Servicio de Oncohematología del Hospital Infantil Niño Jesús de Madrid. El trabajo incluye 65 pacientes oncológicos y 31 donantes. Como factor estimulante de la hematopoyesis se empleó G-CSF . Las leucoaféresis se llevaron a cabo en procesadores celulares de flujo continuo procesando entre dos y tres volemias de sangre total. La estimación de PH mediante citometría de flujo se basa en el recuento de células CD34+. Se realizaron recuentos de células progenitoras tanto en sangre periférica ,como en el propio producto de aféresis. Nuestro estudio se basa en un protocolo estandarizado de cuantificación de células CD34+ por citometría de flujo usando el kit comercial “ Stem-kit CD34+ HPC I Congreso Nacional del Laboratório Clínico – Sevilla, 17/20 Octubre 2007 69 Enumeration kit”(Beckman Coulter). La determinación se lleva a cabo en un citómetro de flujo COLTER ® EPICS® XLTM/XL-MCLTM Resultados Se realizaron un total de 161 recolecciones de progenitores hematopoyéticos en 96 donantes. De ellos 65 son pacientes oncológicos y 31 son donantes HLA - compatibles. Se realizó una media de 3.5 aféresis por donación. En 11 donantes se realizó más de un ciclo de movilización, 2 en diez casos y 3 en un caso. Si consideramos la cifra de 2 x 106 kg células CD34+ como la dosis mínima que garantice un injerto estable, podemos decir que el 100% de nuestros casos sobrepasaron ese valor. No se observaron diferencias en el nº de células CD34+ según el sexo y la edad . En un grupo de 37 donantes se determinó la cinética de las células CD34+ ,así como del nº total de leucocitos en sangre periférica. Conclusion Los resultados presentados indican que la técnica empleada es segura y eficaz, ya que permite obtener productos de leucoféresis con adecuada concentración de progenitores hematopoyéticos que garanticen la repoblación de la médula ósea. 268 DETERMINACION COLORIMETRICA VS HPLC PARA LA MEDIDA DE ACIDO-5-HIDROXI-3-INDOL-ACETICO EN ORINA. CASTRO VEGA, I.; NARVAEZ GOMEZ, A.; LENDINEZ RAMIREZ, A.; DIAZ MONTILLA, E.; GARCIA DE LA TORRE, A.; RUIZ GALDON, M.; Hospital Clínico Universitario Virgen De La Victo - Malaga Introducción El ácido 5-hidroxiindolacético (HIIA), es el principal metabolito del catabolismo de la serotonina. Su medida en orina se usa para el diagnóstico y para la evolución del Síndrome Carcinoide (SC) cuya sintomatología es secundaria a la descarga de serotonina por las células argentafines de la mucosa gastrointestinal afectas de Tumor Carcinoide. La técnica de referencia para la medida de HIIA en orina es la cromatografía de alta resolución (HPLC). Sin embargo, no todos los laboratorios clínicos disponen de esta técnica, existiendo, por tanto, otros métodos colorimétricos para la medida tanto cualitativa como cuantitativa de este ácido. Objetivos En este trabajo, se comparan los criterios de seguridad analítica entre dos técnicas cuantitativas para la medida de HIIA en orina: HPLC con detección electroquímica y medida fotométrica mediante la reacción con 1-nitroso-2-naftol (NN) en presencia de 2-mercaptoetanol (ME), junto con una determinación cualitativa sencilla para descartar la presencia de HIIA. Material y Métodos Se compararon los resultados de tres diferentes métodos aplicados a 27 orinas de pacientes no afectos de SC,y 6 orinas de pacientes diagnosticados de SC.Estos métodos fueron: cualitativo con NN y extracción con diclorometano, fotométrico cuantitativo con NN en presencia de ME, y HPLC con detección electroquímica. Se determinaron los criterios de seguridad analítica (precisión, exactitud y sensibilidad) del método fotométrico y por HPLC. Resultados y Conclusión El método cualitativo, además de su sencillez, presenta una buena sensibilidad diagnóstica ya que identificó al 100% de los pacientes afectos con Síndrome Carcinoide. Sin embargo presentó un 22% de falsos positivos, por lo que es necesaria una medida cuantitativa para poder clasificar bien a estos pacientes. La falta de especificidad de este método puede ser evitada con el empleo de ME que elimina las interferencias dietéticas.En este trabajo la medida fotométrica con ME, redujo la tasa de falsos positivos a un 0%. La correlación de este método con el HPLC presentó una regresión de 0.95 (p
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