INMUNOLOGÍA BÁSICA – CURSADA 2012 La Inmunología estudia ...

) Seroneutralización como método de identificación de anticuerpos neutralizantes:En ciertos casos es útil determinar la presencia de anticuerpos neutralizantes homólogos enel suero de un animal, ya que éstos indican una infección o vacunación anterior. Cuanto mayorsea el título obtenido indicará que cualquiera de estos eventos es más reciente.En seroneutralización existen dos técnicas:1- Suero variable–virus fijo (SV - VF)2- Suero fijo–virus variable (SF - VV)Para ambas técnicas se debe contar con sueros de referencia negativos y positivos.Los sueros positivos se obtienen de animales que han estado en contacto anteriormente con elantígeno (virus) y los negativos de animales que no han tenido contacto alguno con el mismo.Los sueros se inactivan durante 30 minutos a 56ºC para destruir los factores termosensibles delcomplemento y se titulan varias veces en cualquiera de los sistemas sensibles (células,embriones de pollo, ratones, etc.) Por último se calcula la media de los títulos obtenidos en lasdiferentes repeticiones. Estos sueros se conservan fraccionados a -70ºC.Los sueros problema se procesan de la misma manera, es decir, se inactivan 30 minutos a56 ºC antes de proceder a su estudio y se prueban en las diluciones de uso sobre el sistemaseleccionado para evaluar la seroneutralización, para determinar si presentan efecto detoxicidad. En general, en bajas diluciones, la mayoría de los sueros poseen efecto tóxico.En estos casos se debe aumentar las diluciones y considerarse en el cálculo del Índice deSeroneutralización (ver anexo).Los resultados se pueden expresar como:Índice de seroneutralización (IS):Este se obtiene a partir de diferentes cálculos, por ej: Título del virus - Título del virus incubado con suero problema, o Título del virus incubado con suero normal negativo - Título del virus incubado con sueroproblemaPor ejemplo,Título de virus= 10 6.33Título del virus incubado con suero problema= 10 3.40IS = 10 6.33 - 10 3.40 = 10 2.9310 2.93 expresa las dosis neutralizantes 50% del suero problema.Ventajas y desventajas de la elección de cada una de estas técnicas: En la técnica a SF - VV en general no se deben descartar los resultados por problemas detítulo viral, a no ser que se produzca contaminación. La técnica a SV - VF es más precisa, pero si las dosis infectantes obtenidas no son lascorrectas, la prueba debe ser desechada.Las técnicas descriptas para cultivos celulares se pueden realizar en frascos de cultivo o enmicroplacas de cultivo, modificando los volúmenes de reacción.A fin de facilitar la lectura del efecto citopático, se pueden utilizar colorantes sensibles al pHen el medio de cultivo, como por ejemplo rojo fenol, que permiten determinar el estadometabólico de la microplaca. El color será amarillo en los hoyos donde las células mantienen suviabilidad y será rojo en los hoyos donde hubo efecto citopático.Bibliografía1. Guía de trabajos prácticos. Inmunología. Año 19802. Harris, RJC. Techniques in Experimental Virology. New York/London: Academic Press.1964.100