INMUNOLOGÍA BÁSICA – CURSADA 2012 La Inmunología estudia ...

2.a. Aglutinación cualitativa;Los métodos de aglutinación cualitativa son muy utilizados en serología diagnóstica con elobjeto de identificar bacterias, tipificar grupos sanguíneos, etc. En estos casos es indispensabledisponer de anticuerpos monoespecíficos.Estas reacciones se efectúan en portaobjetos mezclando las suspensiones de bacterias ohematíes a identificar, con una batería de anticuerpos con diferente especificidad. La presenciade aglutinación indica la especificidad del sistema reaccionante.MÉTODO (Identificación de microorganismos): Se suspende el cultivo microbiano en estudio en solución salina, procurando que lasuspensión sea lo más densa posible (no menos de 2 x 10 10 bacterias/ ml). En un portaobjetos se coloca una gota de cada uno de los anticuerpos específicos (porejemplo, suero anti Escherichia coli K88, suero anti E. coli K99 y suero anti E. coli F41) y otrade solución salina (control negativo), de modo que estén a una distancia tal que se evite sumezcla accidental. A cada una de estas gotas, se añade un volumen igual de la suspensión bacteriana y semezcla para homogeneizar. El portaobjetos se agita suavemente por rotación manual. Se incuba durante unos minutos a temperatura ambiente y se observa. La aparición degrumos o agregados en alguna de las mezclas indica la identidad de la bacteria en estudio.Estos grumos son de tamaño variable. A veces son visibles a simple vista pero otras veces esnecesario el uso de lupa o microscopio para observarlos.2.b. Aglutinación semicuantitativa:Los métodos semicuantitativos consisten en determinar cuál es la máxima dilución delsuero que se está analizando que es capaz de producir aglutinación. Las diluciones se hacengeneralmente en base dos y el título se expresa por la inversa de la máxima diluciónaglutinante. Por ejemplo, si la dilución 1/1024 aglutina y no lo hace la dilución 1/2048, el títuloserá 1024. Los valores obtenidos son groseros y pueden aproximarse efectuando dilucionesintermedias.El estudio de la cinética del título de anticuerpos específicos permite seguir la evolución de unainfección bacteriana o de una iso-sensibilización, por ejemplo, por antígenos hemáticos.La determinación de anticuerpos por aglutinación puede hacerse mediante reacciones delectura lenta o rápida. En el primer caso (lectura lenta) se emplean suspensiones diluidas y estandarizadas de unantígeno, que se mezclan con volúmenes iguales de diferentes diluciones del suero a valorar,empleando como diluyente una solución salina. Antígeno y anticuerpo se incuban en tubos deensayo a 37ºC durante tiempo variable según el estudio. El título se determina buscando cuáles el tubo con la máxima dilución del suero que presenta aglutinación.Tal es el caso de la prueba de Wright para el diagnóstico de brucelosis y de la prueba deMicroaglutinación de Martin y Petit para el diagnóstico de leptospirosisEn la prueba de Wright la reacción se realiza en tubos, en los que se enfrentan diluciones1/25, 1/50, 1/100 y 1/200 del suero problema con una cantidad estandarizada de bacterias(Brucella abortus cepa 19).Las mezclas (de aspecto turbio blanquecino debido a las células bacterianas) se incuban a37ºC durante 48 horas y luego se observan con luz tangencial sobre fondo oscuro.La aglutinación se manifiesta como formación de grumos grandes que sedimentan en el fondodel tubo. Paralelamente se observa la clarificación del medio líquido, dado que las bacteriasque le daban turbidez se encuentran en los grumos. La aglutinación rápida es muy usada en serología diagnóstica. Por ejemplo para eldiagnóstico de brucelosis (por Brucella abortus, mellitensis y suis) se emplea la Reacción deB.P.A. (Buffered Plate Antigen). En este caso, la reacción se efectúa en placas de vidrio. Elantígeno que se emplea está 20 veces más concentrado que el usado en la aglutinación lenta yla lectura de los resultados se hace a los 8 minutos.En la práctica diaria el uso de las pruebas de aglutinación se encuentra muy estandarizado, alpunto que son las pruebas oficiales para el diagnóstico de la brucelosis bovina. El “Plan87