INMUNOLOGÍA BÁSICA – CURSADA 2012 La Inmunología estudia ...

En los orificios restantes, colocar 2 microlitros de cada una de las diluciones del antígenopatrón, de concentración conocida. Mantener las placas a temperatura ambiente, en cámara húmeda, hasta que el halo deprecipitación no varíe. Evaluar los resultados mediante la determinación del diámetro de los halos de precipitación.Los resultados pueden leerse sobre el material fresco o después de lavar las placas (Vermétodo más adelante). Difusión doble en placa, Inmunodifusión doble o técnica de OuchterlonyOuchterlony describió un método interesante de difusión doble en placas, el cualconsiste en enfrentar las soluciones de antígeno y anticuerpo en perforaciones efectuadas enel gel (agar) a distancias convenientes.De esta manera, ambos difunden a través del agar, se ponen en contacto y producen unabanda de precipitación cuando las respectivas concentraciones están en relación óptima.- Si las concentraciones de Ag y Ac colocados en los reservorios son las que corresponden a lazona de equivalencia, la banda de precipitación se forma aproximadamente en la distanciamedia que separa esos reservorios.- Cuando hay exceso de antígeno, la banda de precipitación se forma próxima al reservorio delanticuerpo- Cuando hay exceso de anticuerpo, la banda de precipitación se forma próxima al reservoriodel antígeno.Con esta técnica puede tenerse una idea de las relaciones entre los pesos moleculares de losantígenos y anticuerpos reaccionantes, cuando se trabaja con concentraciones óptimas de Agy Ac.- Si la banda de precipitación formada es recta, indica que los pesos moleculares de ambosson muy próximos.- Si la banda es cóncava con respecto al reservorio del antígeno, señala que el peso molecularde éste es superior al del anticuerpo.- Si la banda es convexa con respecto al reservorio del antígeno, señala que el peso molecularde éste es menor que el del anticuerpoLos dos fenómenos descritos son una consecuencia de las leyes generales de la difusión, queestablecen que la distancia a la que una sustancia difunde está en relación directa con suconcentración y en relación inversa con su peso molecular.Dependiendo de la cantidad de muestras a analizar o del tipo de estudio a realizar, se empleandistintos esquemas reactivos, como por ejemplo:1) 2) 3) 4)Esta metodología permite determinar si hay más de un sistema reaccionando en formasimultánea, pues cada uno de ellos dará una banda de precipitación específica. Además, nospermite identificar reacciones cruzadas, pues en estos casos habrá fusión de bandas.Originalmente Ouchterlony describió tres tipos de reacciones: de identidad, no-identidad eidentidad parcial. Estas reacciones se esquematizan en la figura 3 para el caso hipotético detres antígenos (a, b, ab) y dos anticuerpos (A: anti-a, AB: anti-a y anti-b).84