INMUNOLOGÍA BÁSICA – CURSADA 2012 La Inmunología estudia ...

Nacional de Erradicación de la Brucelosis Bovina” se basa en la vacunación obligatoria de lasterneras entre los 3 y 8 meses de edad y en la posterior identificación y segregación de losanimales infectados. La identificación de los animales infectados se realiza a través de ladetección de anticuerpos específicos contra Brucella abortus.En el caso particular de la cepa 19 de B. Abortus, la vacunación desencadena en el animaluna respuesta inmune primaria, con niveles de IgM que se mantienen en el tiempo y nivelesbajos de anticuerpos de tipo IgG. Las técnicas serológicas de aglutinación rápida y lenta seemplean para diferenciar los animales que presentan anticuerpos de tipo IgM a consecuenciade la vacunación de aquellos que presentan anticuerpos de tipo IgG inducidos por unainfección activa con la cepa de campo.Los sueros problema son analizados por la prueba de B.P.A, que permite la identificación delos animales que presentan anticuerpos específicos contra Brucella abortus. Esta prueba esmuy sensible pero poco específica y además no permite discriminar si los anticuerpos quereaccionan son de tipo IgG o IgM. Por lo tanto, las muestras que resultan positivas a B.P.A. sonanalizadas luego por las pruebas de Wright y por la Prueba del 2-mercaptoetanol. En amboscasos se enfrentan diluciones seriadas del suero problema con una suspensión estandarizadade Brucella abortus cepa 19. Los tubos de la prueba de 2-mercaptoetanol (2-ME) son tratadospreviamente con una solución de 2-ME que destruye los puentes disulfuro de las IgM, por loque estos anticuerpos pierden su poder aglutinante. De esta manera, si se observa aglutinaciónaún en los tubos tratados con 2-ME, significa que la aglutinación es debida a la presencia deanticuerpos de tipo IgG. Los animales que resultan positivos a esta prueba son consideradoscomo infectados y deben ser segregados del rodeo.Otra aplicación de la técnica de aglutinación es la determinación cualitativa y cuantitativa deanticuerpos antitoxoplasma.MÉTODO: Colocar 60ul de suero a analizar en el pocillo número 1 de una placa de microaglutinacióncon pocillos de fondo cónico. Colocar una gota de buffer borato a temperatura ambiente desde el pocillo número 2 alnúmero 8. Diluir el suero en el buffer borato utilizando un microdilutor, descartar el excedente delpocillo número 8). Colocar una gota de antígeno de toxoplasma en todos los pocillos. Agitar las placas enérgicamente durante 30 segundos cuidando de que no se derrame elcontenido de los pocillos. Colocar un film plástico a fin de evitar la desecación e incubar 24 horas a temperaturaambiente.La lectura se facilita si se efectúa sobre un fondo oscuro o mediante iluminación oblicua. Laausencia de aglutinación se traduce por la aparición de un pequeño botón netamentedestacado. En caso de aglutinación positiva, se observa un tapiz homogéneo de células o unbotón de mayor tamaño que el anterior y con contornos irregulares.El título del suero corresponde a la dilución más elevada que muestre una aglutinación total ocasi total. En este último caso, el diámetro del tapiz debe ser superior a la mitad del diámetrodel pocillo. El control del antígeno debe ser totalmente negativo.También en este caso, para diferenciar si el anticuerpo que actúa es de isotipo IgM o IgG seutiliza la prueba del 2-ME.Los valores límite de esta técnica son 1/128 para el perro y 1/256 para el gato.2.c. Aglutinación pasivaLos anticuerpos específicos contra un antígeno soluble no pueden detectarse porprecipitación si su concentración es inferior a los 20 g/ml. Teniendo en cuenta que laaglutinación es más sensible, se ha procurado fijar antígenos solubles a partículas de modo de88