INMUNOLOGÍA BÁSICA – CURSADA 2012 La Inmunología estudia ...

d) Agregar 25 µl de antígeno (virus) que contenga 4 a 8 unidades hemoaglutinantes, en loshoyos 1 a 11 de la primera hilera correspondiente a cada suero. Agregar 25 µl de PBS enlos hoyos 1 a 11 de la segunda hilera correspondiente a cada suero (para completar elvolumen a 50 µl).e) Homogeneizar golpeando ligeramente la placa e incubar a temperatura ambiente durante60 minutos.f) Añadir 50 µl de suspensión de hematíes al 1% o al 0,5% a todos los hoyos utilizados. Lasegunda hilera de cada suero no contiene virus, sólo suero y glóbulos rojos y nos permiterealizar un control sobre la capacidad hemaglutinante del suero per se. Por su parte, elhoyo 12 de cada hilera contiene glóbulos rojos y el diluyente del virus (PBS), como controlpara descartar una posible hemoaglutinación inespecífica.g) Homogeneizar golpeando ligeramente la placa e incubarla a 4°C durante 16 hs.h) Leer las placas cuando se hayan sedimentado los hematíes de control (columna 12). Lalectura se efectuará inclinando las placas y observando la presencia o ausencia de unbotón bien definido similar al de los hoyos de control.i) El título de Inhibición de la Hemoaglutinación será la mayor dilución del suero que produzcauna inhibición completa de 4 u 8 unidades hemaglutinantes de virus.j) En todas las pruebas deberá incluirse una titulación simultánea del virus para confirmar lapresencia de las unidades de hemoaglutinación requeridasTécnica de Fijación de ComplementoLas características del sistema de complemento han permitido idear una reacciónserológica denominada “Fijación de Complemento”, la que mediante un sistema indicadorpermite determinar la fijación del C a cualquier complejo antígeno-anticuerpo, esté el antígenoen solución o en suspensión. Como sistema revelador se emplea el denominado “sistemahemolítico”, que consiste en una suspensión de complejos antígeno-anticuerpo formados porglóbulos rojos de carnero y anticuerpos con especificidad por estos hematíes (hemolisina).Esta técnica es muy empleada para la identificación cuantitativa de anticuerpos contra unantígeno en particular y es la técnica de referencia para muchas enfermedades infecciosas.Por ejemplo, en el diagnóstico de brucelosis mediante este método, el suero en estudio seincuba con una suspensión estandarizada de Brucella abortus y una cantidad conocida yestandarizada de complemento (medida en unidades CH 50 ). En un paso posterior se agrega elsistema hemolítico. (Figura 1)106