INMUNOLOGÍA BÁSICA – CURSADA 2012 La Inmunología estudia ...

RADIOINMUNOENSAYO (RIA)Los inmunoanálisis radiométricos comprenden un conjunto de técnicas en las cuales lasmoléculas utilizadas se marcan radiactivamente.Como guía general puede considerarse que la determinación de los antígenos se efectúa conanticuerpos específicos marcados radiactivamente y que inversamente, la detección deanticuerpos específicos se realiza con los correspondientes antígenos marcados.El desarrollo del radioinmunoensayo (RIA) comienza en 1956 en trabajos sobre elmetabolismo de la insulina. En estos experimentos se halló que la cantidad de insulinamarcada con átomos radiactivos que se unía in vitro a una fracción de globulinas deindividuos diabéticos, se relacionaba con la concentración de insulina fría (no marcada)existente en el suero del paciente.Entre las ventajas que tiene esta técnica se encuentran: Alto límite de detección Sencillez con respecto a las técnicas utilizadas en endocrinología. Versatilidad para su utilización en pequeños volúmenes y en grandes series.La desventaja más importante consiste en la manipulación de componentes radioactivos querequieren de condiciones de bioseguridad estrictas tanto para la protección del operador comodel medio ambiente, por lo tanto se utilizan en casos puntuales en los que la concentracionesdel analito lo requieran. Por ejemplo, determinación de hormonas o niveles de IgE séricasespecíficas. Dado que el RIA es una técnica que se utiliza generalmente para medir sustanciasque se encuentran en muy baja concentración, los esquemas utilizados corresponden a lamodalidad competitiva (ver descripción referente a la técnica de ELISA).Un ejemplo de la técnica es la determinación de TSH, ensayo que se realiza por el sistema deinhibición competitiva de un antígeno marcado radiactivamente (trazador) a su anticuerpoespecífico por parte del antígeno no marcado. El sistema descrito puede esquematizarse comouna interacción reversible combinada:Ag*Ac +Ag Ac-Ag* Ac-AgDondeAc representa al anticuerpo específico;Ag* es el antígeno marcado (trazador) libre;Ag es el antígeno libre no marcado de las soluciones patrones o de las muestras desconocidas;Ac-Ag* es el complejo soluble entre el anticuerpo y el antígeno marcado, yAc-Ag es el complejo soluble con el antígeno no marcado.La reacción obedece a la ley de acción de masas. El anticuerpo no discrimina entre antígenono marcado (frío) y antígeno marcado (trazador), de modo que cuanto mayor sea la cantidadde antígeno frío presente, menor será la cantidad de trazador que se une al anticuerpo.Bajo este principio, se puede determinar la concentración de antígeno en muestras complejasde fluidos biológicos con suficiente sensibilidad y especificidad, siempre que se cumplan lossiguientes requisitos: Que el trazador sea altamente radiactivo y por lo tanto pueda colocarse en concentracionesinfinitesimales. Que el anticuerpo sea altamente específico, posea muy alta afinidad y se halle en muy bajaconcentración. Que el anticuerpo no reconozca con diferente afinidad el antígeno frío del marcado.62