INMUNOLOGÍA BÁSICA – CURSADA 2012 La Inmunología estudia ...

necesidades de cada caso en particular. (Por ejemplo, una muestra de suero equino secorre a 200 voltios durante 25 minutos; una muestra de suero canino se corre a 180 voltiosdurante 20 minutos).7. Una vez finalizada la corrida, se desconecta la cuba de la fuente de poder y se procede acolorear las tiras, sumergiéndolas durante 5 minutos en la solución colorante de proteinas.8. Se procede luego a la decoloración de la tira, sumergiendo las tiras en solucióndecolorante. El objetivo del decolorante es barrer con el colorante que no se unió a lasproteinas. Este procedimiento se repite hasta que las tiras queden blancas (es convenienteir renovando la solución decolorante durante este procedimiento).9. Las tiras se sumergen en metanol puro durante 30 segundos y luego en la solucióntransparentizante durante 1 minuto.10. Las tiras se colocan sobre un portaobjetos con el ángulo cortado de la tira ubicado en elángulo inferior izquierdo (en forma invertida a como lo sembramos), de esta forma la carasembrada queda boca abajo, mirando el vidrio. No deben quedar burbujas entre el vidrio yla tira.11. Los portaobjetos se colocan en una estufa a 80 ºC hasta su transparentización total. La tirade acetato debe quedar completamente transparente para que pueda efectuarse lamedición por densitometría.12. Las diferentes bandas de proteínas separadas a partir de la muestra original sobre la tira deacetato de celulosa, teñidas y transparentizadas, son leídas en un densitómetro. El aparatodebe ser previamente calibrado según la longitud de onda que vamos a utilizar(generalmente 520 nm), el largo de la tira que vamos a medir y la concentración deproteínas de la que partimos. El densitómetro detecta y registra los datos de absorción deluz de cada banda de proteína y los transforma en un valor numérico de concentración y enun gráfico (ver figura al final del tema)Aplicaciones de la electroforesisLa electroforesis es un método extraordinariamente valioso para el diagnóstico de lasalteraciones en los componentes proteicos del suero, orina y líquido cefalorraquídeo (LCR).Mediante esta técnica se puede diagnosticar un aumento, disminución o alteración de lasproteínas (paraproteínemias)Por ejemplo ciertas patologías como:• Mieloma múltiple: se detecta la aparición de una banda o curva restringida en la región delas gamma globulinas, asociada a hallazgos anormales en la electroforesis de orina(proteína de Bence-Jones)• Hipogammaglobulinemias: Disminución de las gammaglobulinas.• Esclerosis Múltiple: Aparición de bandas oligoclonales en el LCR (en humanos).• Hipoproteinemias por pérdida de proteínas por el sistema digestivo: Disminución general detodas las proteínas.• Déficit de alfa-1 antitripsina: Disminución de las alfaglobulinas.• Enfermedades infecciosas o neoplásicas agudas: Aumento de alfa-1 globulinas.• Síndrome nefrótico o procesos hemolíticos: Aumento de alfa-2 globulinas.Debe hacerse hincapié que la electroforesis es casi siempre una prueba que puede llevar a undiagnóstico presuntivo de las anormalidades de las proteínas del suero, orina o LCR.Ejemplos de hiperglobulinemias• Policlonales- Infecciones virales, bacterianas (brucelosis, piodermis), hongos, parásitos (dilofilarias).- Enfermedades inmunomediadas:Lupus eritematoso sistémicoTrombocitopenia inmunomediadaAnemia hemolítica autoinmune.Pénfigo.Artritis reumatoidea, Poliartritis- Neoplasias (generalmente no relacionadas con el sistema inmune)39