Esquema de la técnica. Utiliza como ejemplo el Ag O de Brucella sp.Ventajas:Es fácil de realizar y los resultados se obtienen rápidamente.Implica solamente 2 pasos.Es una técnica de alta sensibilidad y especificidad.Permite el procesamiento de varias muestras a la vez.Suspensiones turbias tales como leche, sueros lipémicos y yemas de huevo o solucionescoloreadas como sueros hemolizados o sangre entera, no interfieren en la lectura de lasmuestrasCitotoxicidadIntroducción<strong>La</strong> citotoxicidad es un mecanismo efector de las células del sistema inmune que permiteeliminar células infectadas o alteradas del organismo o células de microorganismos uorganismos invasores. Varios tipos celulares, receptores y mecanismos están involucrados eneste mecanismo. Su evaluación permite conocer el nivel de protección frente a enfermedadesinfecciosas de origen viral, capacidad de eliminar células alteradas por procesos tumorales, etc.Hay dos condiciones indispensables para que cualquier mecanismo citotóxico mediado porcélulas se lleve a cabo:1- viabilidad de las células efectoras2- contacto estrecho entre la célula efectora y la célula blanco.<strong>La</strong> lisis de la célula blanco (o célula diana) es la consecuencia de la reacción citotóxica.Cuando se encara el análisis de un fenómeno de este tipo es necesario contar, en primer lugar,con un método apropiado para evaluar la muerte de la célula blanco.112
Por ejemplo, si se trata de una bacteria o un parásito, es posible observar microscópicamentesu destrucción o la inhibición de su capacidad para proliferar en medios de cultivo adecuados,luego de su contacto con la célula efectora. En cambio, si la célula blanco es una célula tumoralo normal, pueden utilizarse colorantes vitales como naranja de acridina o azul tripán (trypanblue) para poner en evidencia la lisis, ya que estos colorantes tienen la particularidad de teñirúnicamente a las células muertas.Asimismo, es posible recurrir a alguna característica metabólica particular que pueda asociarsecon la viabilidad de la célula blanco utilizada en la reacción. Por ejemplo, si se trata de unacélula secretora, medir su capacidad para liberar un determinado producto de secreción.El método más difundido para el estudio de los mecanismos citotóxicos es el de laincorporación de sustancias radiactivas a las células blanco. <strong>La</strong> destrucción de estas célulaspermite que la sustancia radiactiva se libere al medio y pueda ser cuantificada fácilmente.<strong>La</strong>s sustancias radiactivas deben cumplir ciertos requisitos para ser utilizadas: Deben incorporarse a las células blanco en cantidades compatibles con los sistemas demicrorreacciones. No deben liberarse al medio espontáneamente. Su liberación al medio debe tener correlación directa con el efecto lítico producido Una vez liberadas al sobrenadante, no deben ser reutilizables en forma significativa por lascélulas restantes.El agente radiactivo más utilizado es el Na 2 51 CrO 4 (dicromato de sodio) que tiene la ventajaadicional de poner de manifiesto rápidamente el efecto citotóxico. Para el caso de bacterias oparásitos que no incorporan 51 Cr o que lo liberan en forma espontánea, se usan basesnitrogenadas radiactivas, como por ejemplo la 3 H-Timidina (timidina tritiada) que se incorpora alos ácidos nucleicos o la 35 S-Metionina que se incorpora a las proteínas.Mecanismos de CitotoxicidadLos mecanismos de citotoxicidad pueden clasificarse de acuerdo a los requerimientos delsistema, en:• Mecanismos de citotoxicidad específicos: Si es necesaria la sensibilización previa del animaldel cual provienen las células blanco (por ejemplo, citotoxicidad por LT o ADCC).• Mecanismos de citotoxicidad innatos: Si funcionan sin necesidad de sensibilización previa(por ejemplo. citotoxicidad por células NK o por complemento).• Mecanismos de citotoxicidad específicosLinfocitos T:Los mecanismos citotóxicos mediados por linfocitos T son de gran importancia para la defensadel individuo contra las infecciones causadas por virus y contra parásitos intracelulares.Tienen participación, además, en el rechazo de los transplantes y de ciertos tumores.Citotoxicidad Celular Dependiente de Anticuerpos (CCDA o ADCC):Algunas células pueden ejercer citotoxicidad cuando se unen con un anticuerpo ya ligado alantígeno sobre la célula blanco a través de los receptores para Fc (CD16). Este proceso sedenomina citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos.<strong>La</strong> función de CCDA está comprometida en procesos de inmunidad contra tumores, en elrechazo de transplantes, en procesos de destrucción de bacterias, parásitos y célulasinfectadas por virus.<strong>La</strong> reacción citotóxica se inicia con el reconocimiento de los anticuerpos que recubren a lacélula blanco por parte de la célula efectora, a través de receptores para el fragmento Fc de laIg. En la mayor parte de los casos, el anticuerpo que participa en la CCDA es de la clase IgG y,por consiguiente, los receptores para Fc (FcR) presentes en la membrana de las célulasefectoras intervinientes son los receptores para el Fc de la IgG (FcR). Sin embargo, ciertos113