INMUNOLOGÍA BÁSICA – CURSADA 2012 La Inmunología estudia ...

Estructura de LPSPéptidos: Sólo puede utilizarse péptidos de bajo peso molecular (que no superen los 20 kDa),para que no interfiera su tamaño en una menor rotación del antígeno-trazador libre.Equipamiento* El SENTRY (Diachemic corporation) es un instrumento computabilizado para determinar lasunidades de milipolarización (mP) del suero problema. Presenta una ranura para elacoplamiento del tubo de ensayo. Este aparato lee una muestra por vez en tubos de 10mm x75mm. Es transportable al campo y puede funcionar una hora sin fuente externa de energía.* El POLARION (Tecan) También es un lector de polarización pero adaptado para la lectura demicroplacas de 96. Puede leer hasta 1500 muestras por hora.MetodologíaProtocolo FPA1) Agregar 10µl de la muestra (generalmente suero del animal a evaluar) a 1 ml de buffer.2) Leer el blanco3) Agregar 10 µl de antígeno marcado4) Incubar no menos de 2 minutos5) Realizar la lectura de las muestras ya sea en tubos o en multiplacas.6) Como dato orientativo, las muestras con lecturas de 10 mP mayores al control negativo sonconsideradas positivas111