OH - Szerves Kémiai Tanszék

A bázissorrend meghatározásaA nukleotidok kapcsolódási sorrendjét (szekvenciáját) ugyancsak enzimek segítségével derítettékfel. Az ún. restrikciós enzimek meghatározott szekvenciájú kisebb nukleotid láncokat hasítanak ki apolimerből. A szétszabdalt láncok újra egyesíthetők a DNS ligáz enzim segítségével, a DNS polimerázenzim pedig a DNS szintézist katalizálja.A DNS bázissorrendjének meghatározása Sanger nevéhez fűződik: szekvenálási eljárás alapelve nema lebontás, hanem az enzimkatalizált DNS-szintézis irányított megszakítása. A szintézismegszakítására 2’,3’-didezoxi-ribózt alkalmazott, ami a 3’ láncvégen nem tud észteresedni, ezért azeljárás didezoxi módszer néven vált ismertté.A különböző eredetű DNSmolekulákhidrolizátumában apurinbázisok (adenin és guanidin)moláris mennyisége mindigazonos a pirimidinbázisokéval(timin és citozin), sőt továbbiszabályosság, hogy az adeninmennyisége a timinével, valaminta guanin mennyisége a citozinévalazonos (Chargaff-szabályok 1950).Az RNS-ek esetében nincs ileynszabályserűségFrederick Sanger (1918 -)Nobel díj – 1958: inzulin aminosav sorrendjének meghatározásaNobel díj – 1980: DNS szekvencia meghatározásáértErwin Chargaff (1905 – 2002)163