UNIVERSITA' DI ROMA “LA SAPIENZA” - Padis

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Una simile ampia varietà è stata riscontrata per gli anticoagulanti. Si è visto che le sostanze principalmente sintetizzate dagli emitteri (R. prolixus e Eutriatoma maculatus) sono dirette contro il fattore VIII e la trombina mentre il dittero simulide Simulum vittatum sintetizza inibitori del fattore Xa, del fattore VII e un antitrombinico. Poiché i tempi d’innesco per la coagulazione sono superiori alla durata media di un pasto di sangue si suppone che queste sostanze giochino un ruolo importante nel prevenire la formazione di coaguli che potrebbero ostruire l’apparato boccale. Inoltre, in Anopheles è stato osservato che tali molecole potrebbero facilitare i processi digestivi che seguono la pre-diuresi durante la quale vengono concentrate cellule e proteine sieriche e viene secreta l’acqua in eccesso nel sangue (James, 1994, Ribeiro, 1995). Gli antipiastrinici mostrano invece una minore eterogeneità nel bersaglio. La maggior parte degli artropodi ematofagi impiega molecole con attività apirasica. Quest’enzima è responsabile della conversione dell’ATP e ADP in AMP e pirofosfato, in modo da inibire il processo d’aggregazione e reclutamento delle piastrine ADP-dipendente. L’analisi molecolare ha rilevato l’esistenza di 3 classi di apirasi con origini evolutive differenti. In Aedes e Anopheles l’attività apirasica è svolta da un membro della famiglia delle 5’-nucleotidasi (Champagne et al., 1995; Lombardo et al., 2000). Negli emitteri (C. lectularius e R. prolixus) e nel flebotomo Phlebotomus papatasi tale attività e svolta da una differente famiglia di proteine strettamente dipendenti dal calcio (Valenzuela et al., 2001). La terza classe di apirasi appartiene alla famiglia delle ecto-ATPasi ed è stata isolata originariamente in Toxoplasma gondii (NTPasi I e II), oltre ad essere stata ritrovata in una grande varietà di organismi, tra cui piante e uomo (Asai et al., 1995). 1.7.2 Risvolti applicativi dello studio sulle ghiandole salivari Negli ultimi anni lo studio delle ghiandole salivari di vettori di malattie quali malaria, dengue o leishmaniosi ha suscitato notevole interesse negli entomologi molecolari. Ciò è in parte da attribuirsi alla necessità di una più adeguata comprensione del loro ruolo nella trasmissione del patogeno e delle proprietà biochimico-farmacologiche della saliva. Esistono però anche importanti risvolti applicativi legati a questi studi, come ad esempio la possibilità di sviluppare componenti di vaccini (Titus et al., 2006). Numerose indicazioni suggeriscono che la saliva degli insetti vettori svolge un ruolo importante nella trasmissione dei parassiti ed il modello esemplare, in questo senso, è rappresentato da un modello murino di leishmaniosi. Infatti, la saliva di Lutzyomyia 32
longipalpis aumenta considerevolmente la frequenza e la gravità dell’infezione del parassita in topi non esposti in precedenza a punture di flebotomo (Titus and Ribeiro., 1988). Tuttavia, topi immunizzati con la saliva dell’insetto acquisiscono un certo grado di protezione dalla leishmaniosi cutanea. La caratterizzazione delle proteine coinvolte ha permesso di sviluppare due possibili nuovi vaccini che conferiscono protezione contro l’infezione da L. major e sono basati su due proteine salivari: il maxadilan (Max) e SP15. Max è una molecola che interferisce con la normale attività macrofagica in quanto inibisce la produzione di NO e TNF-γ essenziali per una risposta protettiva nei confronti del parassita (Titus et al., 2006). Invece, la funzione svolta dalla saliva di Anopheles nella trasmissione del plasmodio è molto meno chiara. Il raggiungimento della piena infettività degli sporozoiti non sembra essere, come supposto in precedenza, ghiandola-dipendente. In vivo, in un modello murino, è stato dimostrato che dopo l’inoculazione un piccolo numero di sporozoiti entra nei capillari sanguigni, mentre un numero più elevato raggiunge i linfonodi o rimane nel derma fino a 7 ore dopo l’iniezione (Amino et al., 2006). Inoltre, alcuni dati sperimentali indicano che esposizioni ripetute a punture di zanzare non infette (quindi unicamente alla loro saliva) inducono una risposta locale e sistemica che, in una successiva infezione con Plasmodium yoelii, è in grado di contenere lo sviluppo del parassita (Donovan et al., 2007). È evidente quindi come l’individuazione delle componenti salivari in grado di indurre questo tipo di risposta potrebbe essere di grande interesse per l’inclusione in vaccini multi-stage. Un’ulteriore interessante possibilità applicativa è quella di sfruttare la risposta anticorpale dell’ospite alla saliva di insetti ematofagi come possibile marcatore di esposizione. A tale riguardo risultati incoraggianti sono stati ottenuti nel caso di proteine salivari di vettori di leishmaniosi e del morbo di Chagas (Barral et al., 2000; Nascimento et al., 2001). Recentemente è stato suggerito che la risposta anticorpale alla saliva di An. gambiae possa rappresentare una misura del grado di esposizione a rischio di contrarre malaria (Remoue et al., 2006). In questo studio condotto in Senegal su bambini di età inferiore ai 5 anni è riportato che il livello di IgG anti-saliva aumenta con il grado di esposizione a punture anofeliche (basso, medio, elevato). Inoltre, è stata osservata una correlazione positiva tra livelli di IgG rilevati e il rischio di sviluppare la malattia nei tre mesi successivi. La possibilità dell’uso della saliva quale marcatore di esposizione potrebbe essere estremamente utile ma è limitato da alcuni importanti fattori. Innanzitutto la saliva di An. gambiae, come quella di altre specie di zanzare e di altri artropodi ematofagi, è una miscela complessa costituita da differenti proteine con un diverso grado 33
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