UNIVERSITA' DI ROMA “LA SAPIENZA” - Padis

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La precedente espressione in forma ricombinante della proteina SG6 da An. gambiae nel lievito Pichia pastoris aveva permesso di ottenere delle indicazioni preliminari riguardo alla sua immunogenicità (Poinsignon et al., 2008) ed incoraggiando la sua produzione su larga scala per ulteriori indagini epidemiologiche. 1.7.4 Anophelin/cE5 Una altra proteina salivare Anopheles-specifica è l’anofelina (Anophelin/cE5), una piccola proteina salivare di circa 8,6 kDa espressa nelle ghiandole salivari femminili di An. gambiae ma in una certa misura anche nei maschi ed in altri tessuti (Arcà et al., 2005 e dati non pubblicati). In seguito alla rimozione del peptide segnale la proteina, nella sua forma matura, misura 80 amminoacidi e mostra il 32% di identità (26/80) con l’omonima proteina di An. albimanus (Fig. 1.15). Figura 1.15 Allineamento della sequenza aminoacidica (rimossa del peptide segnale) di An. gambiae con l’omologa di An. albimanus. (In giallo sono mostrati gli aminoacidi conservati tra le due specie). Dati in letteratura indicano che l’anofelina di An. albimanus è un potente inibitore della α- trombina ed è quindi in grado di inibire la coagulazione del sangue (Valenzuela et al., 1999; Francischetti et al., 1999). Infatti, la funzione principale della α-trombina è quella di tagliare il fibrinogeno generando la fibrina e un coagulo insolubile. Inoltre regola l’attivazione di fattori coinvolti nella cascata della coagulazione quali il fattore V, VIII, XI e la proteina C. Il ruolo cruciale svolto dall’ α-trombina nei processi fisiologici della coagulazione e negli eventi trombotici ha esercitato una pressione evolutiva negli organismi ematofagi che ha portato alla selezione di molecole biologicamente attive in grado di inibire la α-trombina. Inoltre, sono stati isolati inibitori della trombina anche dal veleno di serpenti e dalle piante (Francischetti et al., 1999). Confrontando le due sequenze dell’anofelina in figura 1.15, si osservano: una regione altamente conservata all’estremità N-terminale (APQYA), aminoacidi conservati carichi 38
negativamente (D8, D13, E14, D18, D13 e E43) nella regione centrale ed una arginina (R53) conservata all’estremità C-terminale. Queste corrispondenze hanno portato all’ipotesi che l’anofelina di An. gambiae sia anch’essa un’inibitore della trombina, al pari dell’omologa di An. albimanus (Valenzuela et al., 1999). Mediante esperimenti di RNAi è stato dimostrato che l’anofelina di An. gambiae è coinvolta effettivamente nel pasto di sangue. In particolare, zanzare sottoposte a silenziamento genico mostrano, rispetto alle zanzare non trattate, sia una riduzione di circa il 15% della capacità di compiere il pasto di sangue sia un aumento del tempo di probing (rispettivamente p=0,03 e p=0,012). Questa minore tendenza all’alimentazione da parte delle zanzare trattate potrebbe essere dovuta alla diminuzione del flusso di sangue nella sede di inoculo giustificata dalla mancanza dell’inibitore α-trombinico (Das et al., 2010). 39
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