Capítulo01 - Embrapa Uva e Vinho

Caracterização e controle das doenças de verão 35A atividade da peroxidases (POX) foi medida espectrofotometricamenteconforme metodologia adaptada de Stadnik e Buchenauer (2000). Para tal, 100 μLdo extrato protéico foram adicionados em 2,9 mL de tampão acetato de sódio (50mM; pH 5,5), contendo guaiacol 0,25% (v/v) (Sigma, EUA) e peróxido de hidrogênio100 mM (Merck, Alemanha). Os valores de absorbância da reação foramregistrados a cada 30 s durante 3 min a 30ºC por meio de um espectrofotômetro a470 nm (modelo 700 Plus, Femto, Brasil).A atividade de glucanases (GLU) foi determinada utilizando-se comosubstrato o composto „carboximetilcurdlan-remazol azul brilhante‟ (CM-curdlan-RBB,Loewe Biochemica, Alemanha), de acordo com metodologia adaptada de Wirth eWolf (1996) e Brisset et al. (2000). Em microtubos de 2 mL (Axygen, USA) foramadicionados 200μL de CM-curdlan-RBB (4,0 mg.mL -1 ) e 200 μL de tampão acetatode sódio (200 mM; pH 5,0) que foram agitadas em vórtex na velocidade de 2111 rpmpor 5 s (modelo AP56, Phoenix, Brasil) e incubadas à 40ºC em banho-maria por10min. Após a adição de 400 μL de extrato foliar em cada microtubo a mistura foiagitada novamente em vórtex e então incubada à 40ºC em banho-maria por 2 h. Asamostras tiveram suas reações interrompidas pela adição de 200 μL de HCl 2N emantidas no gelo por 10 min. Findo este procedimento, as amostras foramcentrifugadas por 10.000 g/10min (modelo 5804R, Eppendorf, Alemanha). Asabsorbâncias dos sobrenadantes das amostras foram determinadas a 600nm emespectrofotômetro. O delineamento experimental foi completamente casualisado,com 5 repetições/tratamento para às 24, 48 e 72 HAI. Para as análises de variânciafoi utilizado software Statistica 6.0 – Stat Soft ® , versão 2001. O teste de regressão foicalculado através do software Sisvar (UFLA), versão 2001.3.2. Avaliação do efeito dos fosfitos sobre a MFG, através da técnica deTLC e BioatografiaOs trabalhos foram realizados no Laboratório de Fitopatologia no Centro deCiências Agrárias, da Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC, FlorianópolisSC. Foi utilizado o fosfito de potássio: Phós-k 0-40-20/Oxiquímica Agrociência,0%(N)-40%(P 2O 5)-20%(K 2O) na seguinte concentração 150mL/100L. A solução defosfito de potássio foi pulverizada sete dias antes da inoculação (DAI) em plântulasde macieira até o ponto de escorrimento. Metade das plântulas tratadas com fosfitoaos 7 DAI permaneceram sobre bancadas de casa-de-vegetação, enquanto outraparte foram inoculadas com uma suspensão de 3x10 5 conídios/ml de C.gloesporioides (Isolado MANE147). Após a inoculação, as plântulas permaneceramem câmara úmida no escuro a 100% UR e 24 ºC por 24 h.Para extração dos compostos antifúngicos dos extratos foliares utilizou-se a2ª e 3ª folha expandida das plântulas, inoculadas ou não com C. gloeosporioides. Asfolhas coletadas foram acondicionadas em papel alumínio e mantidas sob gelo e, emseguida, armazenadas a -20°C até o momento da avaliação. Para extração doscompostos antifúngicos os extratos foram homogeneizados em álcool etílico econcentrados em evaporador rotativo a 40ºC, e processados de acordo com ametodologia de Stadnik e Bettiol (2007). Em resumo, para determinar a atividadeantifúngica das frações nas cromatofolhas foi utilizado Alternaria brassicicola. Para