Analytica 90

mL, o que é responsável pelo sabor
amargo (6, 11, 17, 20).
A maior parte da quinidina absorvida
é metabolizada pelo fígado, no
entanto, 13% a 27% é excretado
na forma intacta pelos rins. Muitos
metabólitos da quinidina já foram
identificados, tais como 3-hidroxiquinidina,
2-oxoquinidinona, quinidina-N-oxido,
quinidina-10,11-
-dihidrodiol e O-desmetilquinidina,
que quando estudados isoladamente
ou em combinação com a
quinidina apresentaram atividade
antiarrítmica (15, 16, 18).
Em termos toxicológicos, o consumo
da quinina deve ser evitado
por mulheres grávidas, indivíduos
com quadro de insuficiência hepática
e, principalmente, crianças.
Com o consumo de quinina em doses
excessivas, pode-se observar
intoxicação e um quadro reversível
chamado cinchonismo (4, 24).
O cinchonismo é uma síndrome
causada por envenenamento
agudo e é comumente observada
após tentativas de abortos, suicídios
ou envenenamento acidental
em crianças. A perda da visão é
um dos mais importantes efeitos
colaterais reportados na literatura,
mas o local onde ocorre o efeito
tóxico na retina e a gestão para o
seu tratamento continua sendo discutido
(1).
Tendo em vista todos os riscos e
aspectos toxicológicos da quinina,
o estudo tem como objetivo o desenvolvimento
e validação de uma
metodologia para a quantificação
de quinina em extratos hidroalcoólicos
de Quina vermelha (Cinchona
officinalis).
2. Materiais e Métodos
2.1. Reagentes
Utilizou-se acetonitrilo com pureza
superior a 99,98% (J.T.Baker®),
água ultrapura (sistema de purificação
Synergy®), fosfato de potássio
com pureza superior a 99,9% (
Merck®) e ácido fosfórico, com
teor superior a 85% (Quemis®).
Como padrões de referência, foram
utilizadas quinina 98,6% (Sigma-
-aldrich®) e quinidina a 91,3%
(Sigma-aldrich®).
2.2. Instrumentação
O sistema integrado de cromatografia
líquida de alta eficiência
Merck Hitachi Chromaster® é
composto por um detector DAD
5430 VWR®, um injetor automático
VWR® Hitachi 5210 Chromaster,
um forno VWR® Hitachi 5310
Chromaster e uma bomba quaternária
VWR® Hitachi Chromaster
5110. As fases móveis foram desgaseificadas
no degasser Branson
3510 e o ajuste do pH foi efetuado
com pHmetro Mettler Toledo MP
220 (7,8, 27).
2.3. Preparo das amostras
Para o preparo das amostras de
extrato hidroalcoólico de Cinchona
officinalis pesou-se 1 g do extrato
em balão volumétrico de 5 mL e
completou-se o volume com acetonitrilo,
obtendo-se uma solução
de proporção 1:5, de extrato e acetonitrilo,
respectivamente. Após a
amostra diluída, filtrou-se em filtro
CHROMAFIL® Xtra, PET – 20/25
0,20 µm diretamente dentro de um
Tempo
(min)
0
10
15
20
22
25
26
27
31
32
35
36
40
KH2PO4 0,05 M (pH=3,0) (%)
96
90
90
88
87
87
87
96
96
40
40
96
96
vial e, posteriormente, injetou-se no
equipamento (17,21).
2.4. Preparo dos padrões
Para o preparo dos padrões,
inicialmente pesou-se 10 mg do
padrão de quinina em balão volumétrico
de 100 mL. Em seguida,
adicionou-se aproximadamente 2
mL de acetonitrilo e levou-se ao
ultrassom por 10 minutos. Após
dissolvido, completou-se o volume
do balão com acetonitrilo, obtendo
uma solução estoque de 1mg/mL.
A partir desta solução foi preparada
uma solução mãe de 100 µg/mL e,
a partir dessa, foram feitas diluições
nas concentrações de 5, 10,
20, 30 e 50 µg/mL para a construção
da curva de calibração.
2.5. Condições cromatográficas
Utilizou-se uma Coluna Superspher®,
RP-18, (4,6 x 150 mm, 5
mm; AgilentTM); fase móvel composta
por tampão fosfato monopotássico
0,05M em água pH = 3,0
e acetonitrila com fluxo de 1 mL/
min com detector DAD (arranjo de
fotodiodos) ajustado em comprimento
de onda ʎ = 254 nm (split
bandwidth = 4 nm; DAD off = 32
minutos). O volume de injeção foi
de 5 µL (17, 7, 8).
2.6. Parâmetros de validação
A validação seguiu os protocolos
segundo a RE nº 899 para garantir
ACN (%)
4
10
10
12
13
13
13
4
4
60
60
4
4
Tabela 1. Gradiente do método
REVISTA ANALYTICA - AGO/SET 17
23