Allgemeine Verwaltungsvorschrift über die Durchführung der ...

AVV LmH Anlage 4 1360
© Behr’s Verlag, Hamburg
2.5.2.2 Tiefenprobe
Es ist Material aus dem geometrischen Mittelpunkt des Füllgutes (Kern)
zu entnehmen.
2.6 Durchführung
Mit sterilen Entnahmegeräten werden von der Oberfläche der zu untersuchenden
Probe Würfel mit einer Kantenlänge von 1 cm herausgeschnitten
und mit der von der Probenoberfläche stammenden Würfelseite auf
dem Objektträger abgedruckt; alternativ kann ein Objektträger direkt
auf den zu untersuchenden Oberflächenteil des Probenwürfels gelegt
und kurz angepresst werden.
Vor der Entnahme von Material aus der Tiefe der Probe ist die Oberfläche
des Füllgutes zur Vermeidung einer Verschleppung von Keimen in
die Tiefe kurz und kräftig abzuflammen (Bräunung bis etwa 2 mm Tiefe).
Mit sterilen Entnahmegeräten wird an der erforderlichen Stelle Material
entnommen und auf einem Objektträger abgedruckt.
Die Entnahmegeräte sind bei jeder Probe zu wechseln. Während der Entnahme
von Unterproben von derselben Probe ist eine Zwischendesinfektion
in Äthanol oder Spiritus mit anschließendem Abflammen des Alkohols
nach jeder Unterprobe ausreichend.
Die Abdruckpräparate werden 60 Minuten bei Zimmertemperatur luftgetrocknet
oder 30 Minuten im Brutschrank bei +30 °C hitzefixiert. Anschließend
werden sie über einem Becherglas vorsichtig dreimal durch
Auftropfen von Diäthyläther auf das Präparat entfettet. Nach völliger
Abtrocknung wird das auf die Objektträger übernommene Untersuchungsmaterial
durch dreimaliges langsames Durchziehen durch die
„kalte“ Flamme eines Brenners hitzefixiert und die Bakterienfärbung
durchgeführt. Dabei ist zu beachten, dass gegenüber Ausstrichpräparaten
die Abdruckpräparate meist ein geringeres Haftungsvermögen auf
dem Objektträger aufweisen. Daher ist eine schonende Färbung auf einer
Färbebank zu empfehlen.
Die Färbung nach Gram erfolgt nach Labor-Vorschrift.
Nach Abschluss der Färbung wird das Präparat unter dem Mikroskop
bei 1 000-facher Vergrößerung (mit Ölimmersion) und einer Sehfeldzahl
von 18 bis 22 untersucht. Die Überprüfung auf das Vorhandensein gramnegativer
Keime ist besonders sorgfältig vorzunehmen, da von einer störenden
Rotfärbung des Untergrundes durch das Untersuchungsgut auszugehen
ist.
Der präparierte Objektträger ist – sofern er nicht zu Vergleichszwecken
vorübergehend aufgehoben wird – wie infektiöses Material zu behandeln
und entsprechend zu entsorgen.
2.7 Auswertung
Es wird die Anzahl der pro Gesichtsfeld nachgewiesenen Mikroorganismen
(arithmetisches Mittel aus 20 Gesichtsfeldern) in folgender Abstufung
angegeben:
Lebensmittelrecht 208. Akt.-Lfg.: Stand Oktober 2007 63