Allgemeine Verwaltungsvorschrift über die Durchführung der ...

AVV LmH Anlage 4 1360
© Behr’s Verlag, Hamburg
eine gleichmäßige Schichtdicke von 2 mm vorhanden ist. Nach dem
Erstarren des Nährbodens sind die Petrischalen unverzüglich auf +3
bis +5 °C zu kühlen und bis zur Benutzung bei dieser Temperatur zu
lagern. Die vorbereiteten Testplatten sollten innerhalb von drei Tagen
nach der Herstellung verwendet worden sein.
3.9.3.2 Trimethoprimlösung
10 mg Trimethoprim (TMP) werden in 10 ml Ethanol unter Schütteln
bei +50 °C gelöst (Stammlösung). Diese Lösung ist bei kühler und
dunkler Aufbewahrung mehrere Monate haltbar. Durch Zugabe von
190 ml sterilem Aqua dest. wird die Lösung auf eine Konzentration
von 50 µg Trimethoprim/ml eingestellt (Gebrauchslösung). Die Haltbarkeit
dieser Lösung beträgt bei Kühllagerung mindestens 14 Tage.
3.9.4 Testkeim und Testblättchen
3.9.4.1 Testkeim
Als Testkeim ist Bacillus subtilis BGA zu verwenden. Er ist vom Bundesinstitut
für Risikobewertung, Postfach 33 00 13, 14191 Berlin, oder
vom Fachhandel zu beziehen. Die abgebenden Stellen haben Wachstumseigenschaften
und Resistenzverhalten des Testkeims gegenüber
verschiedenen antimikrobiell wirksamen Stoffen regelmäßig zu überprüfen.
Hierfür ist eine Kontrolle nach Nummer 3.9.4.1.2 vorzunehmen.
3.9.4.1.1 Sporensuspension
Die Sporensuspension kann in den Untersuchungsstellen hergestellt
oder gebrauchsfertig vom Fachhandel bezogen werden.
Zur Herstellung der Sporensuspension wird ein Nährboden mit der in
Nummer 3.9.3.1 genannten Zusammensetzung auf einen pH-Wert von
7,0 ± 0,2 eingestellt und nach massiver Ösenbeimpfung oder durch
Überschichten mit 1 ml einer Keimsuspension mit dem in Nummer
3.9.4.1 genannten Testkeim 10 Tage bei +30 °C bebrütet. Danach wird
der Testkeim mit steriler physiologischer NaCl-Lösung abgeschwemmt.
Die Abschwemmung wird 10 Minuten bei 3000 U/min zentrifugiert;
anschließend wird der Überstand abgegossen, dem Sediment nochmals
sterile physiologische NaCl-Lösung zugegeben und abermals
10 Minuten bei 3000 U/min zentrifugiert. Nach erneutem Abgießen
des Überstandes wird sterile physiologische NaCl-Lösung zugegeben
und die Suspension 30 Minuten bei +70 °C erhitzt. Die so gewonnene
Sporensuspension wird auf eine Dichte von ca. 10 7 Sporen/ml eingestellt
(Gebrauchssporensuspension). Sie ist bei Kühlschranktemperatur
(+3 bis +5 °C) mehrere Wochen haltbar. Die Überprüfung der Dichte
erfolgt als kulturelle Keimzählung im Oberflächenverfahren auf
dem nach Satz 2 hergestellten Nährboden. Wird zur Herstellung der
Suspension eine Bakterienkultur verwendet, die in der Untersuchungsstelle
über mehrfache Passagen kultiviert worden ist, so ist spätestens
nach jeder fünften Passage eine Überprüfung nach Nummer 3.9.4.1.2
vorzunehmen. Ist dies nicht möglich, ist eine neue Kultur des Testkeimes
von den in Nummer 3.9.4.1 genannten Stellen zu verwenden.
Lebensmittelrecht 208. Akt.-Lfg.: Stand Oktober 2007 73