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Abb. 3: iQ5 TM High End real-Time PCR-System zur absoluten und relativen
Quantifizierung und Verwendung von einem oder mehreren Referenzgenen.
Selbst große Genstudien mit bis zu 5.000 Proben lassen sich innerhalb der
Software nach Algorithmen von Livak, Pfaffl oder Vandesompele verarbeiten.
eines oder mehrere Referenzgene in die Berechnung einfließen und
ob unterschiedliche Produktbildungseffizienzen der PCR-Produkte
mitberechnet werden.
All diese Algorithmen führen zu sehr exakten und miteinander vergleichbaren
Resultaten, sofern die erforderliche Umsicht bei der Wahl
der nichtregulierten Referenzgene gewährt wird.
High end-Systeme wie das iQ5 TM - oder MyiQ TM -System können
innerhalb der real-time PCR-Software sogar Genstudien mit bis zu
5.000 Proben auswerten.
Bei Berücksichtigung aller genannten Maßnahmen im Rahmen
einer „Good Laboratory Practice“ (GLP) ist man hervorragend gegen
die „Geister der PCR“ geschützt. Sollte aber dennoch einmal einer in
Erscheinung treten, dann rufen Sie einen unserer „Ghost Buster“-PCR-
Spezialisten an.
Literatur
[1] Saiki R.K., Scharf S., Faloona F., Mullis K.B., Horn G.T., Ehrlich H.A., Arnheim N.: Enzymatic amplification of β3-globin
genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science 230 (1985), 1350-1354
[2] Mullis K.: Dancing Naked in the Mind Field. Pantheon Books, New York, 1998
[3] Sano et al: Immuno-PCR: very sensitive antigen detection by means of specific antibody-DNA conjugates. Science 258
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[5] Wittwer, Carl T., Reed, Gudrun H., Gundry, Cameron N., Vandersteen, Joshua G. and Pryor, Robert J.: High-Resolution
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[6] Strong, William and Rubio, Theresa: Using the ExperionTM Automated Electrophoresis System to assess RNA Quality and
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Delta C(T)) Method. Methods 25 (2001), 402-8.
[8] Pfaffl M.W.: A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR. Nucleic Acids Res 29 (2001), :e45.
[9] Vandesompele J., De Preter K., Pattyn F., Poppe B., Van Roy N.,
De Paepe A., Speleman F.: Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of
multiple internal control genes. Genome Biol 3 (2002) RESEARCH0034.1-RESEARCH0034.11
Korrespondenzadresse
Dr. Marcus Neusser, Bio-Rad Laboratories GmbH
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