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GE Healthcare Das einzig Schwierige an der Spektralphotometrie bleibt der Name. Zuverlässige, präzise Ergebnisse für Nukleinsäure- und Proteinbestimmungen erhalten Sie jetzt ganz unkompliziert mit den neuen UV/VIS Spektralphotometern der Ultrospec oder GeneQuant Serie von GE Healthcare. Mit herausragenden Eigenschaften erleichtern wir Ihre Arbeit: • Ein integrierter LCD-Bildschirm mit hochauflösender Graphik zeigt Ergebnisse schnell und übersichtlich an. • Spektralphotometer von GE Healthcare bieten vorprogrammierte Methoden zur Quantifizierung von Nukleinsäuren, Proteinen, Cy 3- und Cy5-Farbstoffen sowie Bakterienkulturen. • Auf Knopfdruck werden Eichkurven, kinetische Messungen und Verhältnisbestimmungen durchgeführt. GE Healthcare bietet Ihnen eine breite Palette an Spektralphotometern, die von einfachen Konzentrationsbestimmungen bis zu aufwändigen, präzisen Kinetikmessungen vielseitige Anwendungen ermöglichen. Life Science Re-imagined ist unsere Lösung für Sie. Unsere Innovationen erleichtern Ihre wissenschaftliche Arbeit und schenken Ihnen Zeit, um neues Wissen zu schaffen. Erleben und testen Sie die Photometer-Serie von GE Healthcare. Kontaktieren Sie Ihre lokalen Ansprechpartner unter productde@ge.com oder besuchen Sie uns im Internet unter: www.gelifesciences.com/spectros © 2007 General Electric Company – All rights reserved. First published May 2007 GE Healthcare Bio-Sciences AB, Björkgatan 30, 751 84 Uppsala, Sweden GE26-07
SNP-Diagnostik � B L I T Z L I C H T Schnelle SNP-Diagnostik mit rapid-PCR und Fluoreszenz- Endpunktdetektion Melanie Trenkmann, Elmara Graser, Timo Hillebrand, Alexander Berka Analytik Jena AG, Business Unit ‘Bio Solutions’ Die Ansprüche an ein PCR-System und die benötigten Geräte steigen, wenn mehrere Fragmente innerhalb eines Reaktionsraumes amplifiziert werden sollen. Auch ist eine elektrophoretische Auswertung der PCR-Produkte nur dann möglich, wenn diese sich in der Größe unterscheiden. Bei der Diagnostik von Single Nukleotid-Polymorphismen (SNPs), wie dem SNP309 in der Promotorregion des Mdm2-Gens (vgl. Abb. 3), der mit der Entwicklung von Tumoren in Verbindung gebracht wird, scheitert die Elektrophorese. Um dennoch spezifische Ergebnisse in kürzester Zeit zu generieren, können PCR-Produkte über Fluoreszenzsignale ausgewertet werden. Rapid-PCR und die anschließende Endpunktdetektion ermöglichen die parallele Analyse des Wildtyp- und des mutanten (SNP309) Allels im Mdm2-Gen innerhalb nur einer Stunde. Das Verfahren der PCR (engl. Polymerase Chain Reaction) ist eine der wichtigsten molekularbiologischen Methoden überhaupt und wird für ständig neue Anwendungen herangezogen. Da jedoch die Zusammenhänge zwischen Temperatur und Wechselwirkung der Einzelkomponenten sehr komplex sind, gestaltet sich die Entwick- lung von Experimenten zum Teil immer noch schwierig und vor allem langwierig. Mit der Entwicklung der rapid-PCR und entsprechender Thermocycler, wie dem SpeedCycler (Abb. 2) kann die Gesamtlaufzeit einer PCR erheblich reduziert werden. Der Endpunktdetektor SpeedScan (Abb. 2), dessen Funktionalität in der Aufnahme und Abb. 1: Die schematische Darstellung des p53-Signalweges als Stressantwort zeigt die Regulation von p53 über Mdm2 als negative Rückkopplung und die Funktion des Tumorsuppressors in der Zellentwicklung 2,5,7 . Analyse von Fluoreszenzsignalen liegt, ermöglicht anschließend über ein Analysentool zur Gerätesoftware ASpectFA eine einfache und schnelle SNP-Diagnostik. Der Single Nukleotid-Polymorphismus SNP309 im Mdm2-Promotor wird direkt der beschleunigten Tumorentstehung erblich Abb. 2: Die Rapid-PCR mit dem SpeedCycler erlaubt sehr schnelle PCR-Amplifikationen in Anlehnung an die erheblich verkürzten Haltezeiten bei gleichzeitiger Reduktion der Probenvolumina. Durch die Endpunktdetektion der amplifizierten PCR-Produkte über Fluoreszenz mittels SpeedScan entfällt die Notwendigkeit zeitintensiver und zum Teil gesundheitsschädlicher Elektrophoresen vollständig. bedingter und sporadisch auftretender Krebsarten zugeordnet. Das Mdm2-Protein nimmt hierbei eine zentrale Stellung im Signalweg des Tumorsuppressors p53 (Abb. 1) ein und fungiert als direkter Negativregulator von p53 1 . Anhand der spezifischen SNP309-Diagnostik wird nachfolgend die hohe Präzision der genannten Analysengeräte und die enorme Reduktion des Zeitaufwandes verdeutlicht. Bei zellulärem Stress, wie DNA-Schäden oder Anomalien im Zellzyklus, wird der Tumorsuppressor p53 aktiviert. Dieser initiiert Transkriptionsprozesse, die zur Reparatur schadhafter DNA, zum Wachstumsarrest von Zellen und zum Teil zur Apoptose führen. In Folge dessen kann die Vermehrung anomaler DNA und somit die Tumorentstehung verhindert werden 1-4 . In intakten Zellen ist die Konzentration an p53 gering und muss streng kontrolliert werden, um einen beschleunigten Alterungsprozess aufgrund übermäßiger Apoptose zu hemmen 2 . Der p53-Hauptregulator ist Mdm2, ein Protein, das zum einen als E3-Ubiquitin-Ligase und zum anderen als Inhibitor der p53-Transkriptionsaktivität fungiert. Darüber hinaus regelt p53 die Expression des Mdm2-Proteins und somit die eigene Konzentration über eine negative Rückkopplung 1-6 . Als Antwort auf DNA-Schäden wird zunächst eine Proteinkinase aktiviert, die p53 phosphoryliert und zur Dissoziation des p53-Mdm2-Komplexes führt. Unmittelbar nachdem die zelluläre und genetische Stabilität wieder erreicht ist, erfolgt die Deaktivierung der Proteinki- Kennziffer 15 LW 05 · www.biocom.de � 10 | 8. Jahrgang | Nr. 5/2007 LABORWELT
Seite 1 und 2: LABORWELT Nr. 5 / 2007 - Vol. 8 Das
Seite 3 und 4: � Zum Thema � Life Sciences-Fir
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