2007 - Instituto de Investigación Sanitaria La Fe

4.2.20.HepatologíaexperimentalResponsable:José Vicente Castell RipollEquipo:M. J. Gómez-Lechón Moliner, M. T. Donato Martín, R. Jover Atienza, R. BortAlmenar, M. Pascual Lucas, A. Bonora Centelles, M. Moya Serés, N JiménezPous, E. Belenchón González, C. Corchero Roldán, C. Guzmán Prieto, G. PérezCataldo, D. Hernández Pérez, A. Negro Lacort, S. Montero TorralbaDESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD INVESTIGADORAEstudio de la regulación de la expresión de geneshepáticos en hepatocitos humanos y de los factoresexógenos clave en la transdiferenciación hepáticain vitro (células madre adultas y embrionarias humanas).Desarrollo de lineas celulares manipuladas genéticamentecon expresión de enzimas de biotransformación(citocromos P450, CYPs) y factores detranscripción hepáticos reguladores de la expresiónde los CYPs, mediante la utilización de vectoresadenovirales y lentivirus.Evaluación in vitro de la hepatotoxicidad de fármacosen desarrollo.Terapia celular hepática: Transplante celular hepáticopara el tratamiento de las metabolopatías congénitas.LÍNEAS DE INVESTIGACIÓNUn m o d e l o h e pat o c e l u l a r in v i t r o pa r a i n v e s t i g a r l ae s t e ato s i sEl objetivo es definir un modelo experimental deesteatosis hepatocelular con un perfil acumulaciónde lípidos semejante al del hígado esteatósico yen el que los efectos metabólicos y los citotóxicos/apoptóticos pudieran ser diferenciados. El palmitato(C16:0) y el oleato (C18:1) son los ácidos grasos(FFAs) más abundantes en los triglicéridos hepáticos.Para inducir la sobrecarga de grasa en célulasen cultivo, las células HepG2 se incubaron con mezclasde FFAs con diferentes proporciones de ambosácidos grasos saturados. Las células tratadas conesta mezcla constituyen un modelo celular que mimetizala condición de esteatosis crónica benignay pueden ser adecuados para investigar el impactoque tiene la acumulación excesiva de grasa en el hígadoexcluyendo otros factores que pudieran influirsobre el comportamiento de los hepatocitos.Re g u l a c i ó n t r a n s c r i p c i o n a l y e x p r e s i ó n d e l CYP3A4 e nh e pat o c i t o sEl citocromo P4503A4 (CYP3A4) es el P450 metabolizadorde fármacos con el mayor nivel de expresiónen el hígado humano y se expresa de modoconstitutivo en el hígado pero también se puedeinducir su transcripción por xenobióticos. Existeuna gran variabilidad intra- e interindividual en suexpresión y entre los factores de transcripción implicadosen la expresión del CYP3A4 hay tanto factoresde transcripción hepáticos como receptoresnucleares (C/EBPα, C/EBPβ, HNF4α, HNF3γ, CARy PXR). Dado que las variaciones en la expresióndel CYP3A4 afecta en gran medida a la eficacia y ala toxicidad de los medicamentos, debe implementarseel desaarrollo de otros modelos hepáticos alternativosa los hepatocitos humanos cultivados quesean fiables para predecir el papel del CYP3A4 en elmetabolismo de fármacos y útiles para el desarrollode medicamentos.De t e r m i n a c i ó n d e a c t i v i d a d e s d e l o s p r i n c i pa l e s e n z i m a sP450 h u m a n o s e n p l a c a s d e 96 p o c i l l o s m e d i a n t ec r o m at o g r a f í a l í q u i d a a c o p l a d a a e s p e c t r o m e t r í a d em a s a s e n t á n d e mDurante las etapas iniciales del desarrollo de nuevosfármacos, cientos de moléculas son testadas antesde la selección e identificación de un único candida-78 - Fundación para la Investigación del Hospital Universitario La Fe - Memoria 2007