Drosophila - Severo Ochoa - Universidad Autónoma de Madrid

Jefe de Línea /
Group Leader:
Francisco Sobrino
Personal Científico /
Scientific Staff:
Rosario Armas
Postdoctorales /
Postdoctoral:
Margarita Sáiz
María Flora Rosas
Mónica Gutiérrez
Becarios Predoctorales /
Predoctoral Fellows:
Raúl Postigo
Miguel Angel Martín
María Teresa Sánchez
Técnicos de Investigación /
Technical Assistance:
Mónica González
Marina López
Estudiantes /
Undergraduate Students:
Yuri A. Vieira
Ángela Vázquez
Científicos Visitantes /
Visiting Scientists:
Søren Kamstrup, ç
A. Braedfor
Bertha Landeros
Llilianne Ganges
Inmunología y Virología Immunology and Virology
Desarrollo de nuevas estrategias
para el control y prevención
de enfermedades virales: el virus
de la fiebre aftosa como modelo
Resumen de investigación
El virus de la fiebre aftosa (VFA) constituye un interesante
modelo, de gran importancia económica, para entender
cómo las interacciones entre un virus con gran capacidad
de variación y sus diferentes hospedadores naturales,
condicionan el control de la enfermedad que produce.
Se está trabajando en el desarrollo de nuevas vacunas
marcadoras frente al VFA (péptidos, vacunas DNA y VLPs
heterólogas) que induzcan respuestas humorales y
celulares protectoras, empleando como principal modelo
animal un importante hospedador natural de este virus, el
cerdo y el análisis de su inmunogenicidad en modelos
animales. Algunas de las estrategias desarrolladas están
siendo también empleadas para el desarrollo de nuevas
vacunas frente a otra importante enfermedad viral animal, la
peste porcina clásica.
Se trabaja, también, en el análisis funcional de distintas
proteínas virales en la internalización, el ciclo de
multiplicación y los mecanismos que median la
patogenicidad del VFA, y de otros Picornavirus relacionados,
en cultivos celulares y modelos animales. En particular, se
estudia la implicación funcional de proteínas no
estructurales, como las correspondientes a la región 3AB, en
la virulencia y rango de hospedador del virus. Para ello se
están caracterizando las interacciones de proteínas del virus
con elementos celulares empleando ensayos de expresión
transitoria y estable en líneas susceptibles, así como las
propiedades biológicas de mutantes obtenidos utilizado
clones infecciosos. Se trabaja también en el estudio de la
funcionalidad de regiones no codificantes del RNA viral.
Además de información básica sobre el ciclo de
multiplicación del VFA, los resultados obtenidos están siendo
empleados para la identificación de dianas antivirales y el
desarrollo de nuevas estrategias vacunales.
Parte de este trabajo ha sido desarrollado en las
instalaciones BSL3 del CISA-INIA.
New strategies for prevention and
control of viral diseases: foot-andmouth
disease virus as a model
Research summary
Foot-and-mouth disease virus (FMDV) is one of the major
concerns for animal health. It is also an interesting model
system for understanding the interactions of a highly
variable virus and its natural hosts and the implications of
these interactions on disease control.
We are working in the development of new FMDV marker
vaccines (peptides, DNA vaccines and heterologous VLPs)
that can induce protective humoral and cellular immune
responses, using as animal model an important natural host:
the pig. Some of these strategies are also being applied to the
development of new vaccines against classical swine fever.
We are also analyzing the functional role of FMDV proteins
on the internalization, the replication cycle and the
mechanisms mediating the pathogenesis of FMDV in cell
culture and animal models. Special attention is paid to the
functional implications of non-structural proteins, like those
from the 3AB region, in virus virulence and host range. This
in mainly approached by the study of their interaction, in
transient and stable expression assays, with components of
susceptible cells. The biological properties of FMDV
mutants constructed from infectious full-length clones are
being characterized. A parallel study of the functional
implications of non-coding RNA regions is also being
conducted. Besides providing basic information on the
FMDV multiplication cycle, the results obtained are being
used for the identification of antiviral targets and the design
of new vaccine strategies
C14
Publicaciones
Publications
De Oliveira, E., Jiménez-Clavero, M. A., Núñez, J. I., Sobrino, F. and
Andreu, D. (2005). Analysis of the immune response against mixotope
peptide libraries related to foot-and-mouth disease virus. Vaccine 23,
2647-2657.
Ganges, L., Barrera, M., Núñez, J. I., Blanco, I., Frias, M. T.,
Rodríguez, F. and Sobrino, F. (2005). A DNA vaccine expressing the
E2 protein of classical swine fever virus elicits T cell responses that
prime for rapid antibody production and total protection upon viral
challenge. Vaccine 23, 3741-3752.
Díaz de Arce, H., Ganges, L., Barrera, M., Naranjo, D., Sobrino, F.,
Frías, M. and Núñez, J. I. (2005). Origin and evolution of viruses
causing classical swine fever in Cuba. Virus Res. 112, 123-131.
Núñez, J. I., Fussi, P., Borrego, B., Brocchi, E., Pacciarini, M. L. and
Sobrino, F. (2006). Molecular epidemiology of the 1993 Italian footand-mouth
disease outbreak. Arch. Virol. 151, 127-142.
Borrego, B., Fernández-Pacheco, P., Ganges, L., Doménech, N.,
Fernández-Borges, N., Sobrino, F. and Rodríguez, F. (2006). DNA
vaccines expressing B and T cell epitopes can protect mice from
Foot-and-mouth disease virus infection in the absence of specific
humoral responses. Vaccine 24, 3889-3899.
García-Briones, M. M., Rosas, M. F, González-Magaldi, M., Martín-
Acebes, M. A., Sobrino, F. and Armas-Portela, R. (2006). Differential
distribution of non-structural proteins of foot-and-mouth disease virus
in BHK-21 cells. Virology. 349, 409-421.
Villén, J., Rodríguez-Mias, R.A., Giralt, E., Sobrino, F. and Andreu, D.
(2006). Racional disection of binding surfaces for mimicking
discontinuous antigenic sites. Chem. Biol. 13, 815-823.
Serrano, P., Rodríguez, M.R., Saiz, M. and Martínez-Salas, E. (2006).The
3´end of FMDV genome establishes two distinct long-range RNA-RNA
interactions with the 5´end region. J. Gen. Virol. 87, 3013-3022.
Barfoed, A. M., Rodriguez, F., Borrego, B., Therrien, D., Sobrino, F.
and Kamstrup, S. (2006). DNA immunization with 2C FMDV nonstructural
protein reveals the presence of an immunodominant CD8+,
CTL epitope for Balb/c mice. Antiviral Res. 72, 178-189.
CBM 2005/2006
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Figura 1. Doble inmunofluorescencia de células BHK-21 a las 24 h posttransfección
con PRSV-3A. A) Expresión de 3A detectada empleando un suero de
conejo anti-3A y un anticuerpo secundario anti-conejo acoplado a Alexa-456. B)
Filamentos de actina detectados utilizando faloidina acoplada a Alexa-488.
Figure 1. Double immunofluorescence of BHK-21 cells at 24 h post-transfection
with plasmid PRSV-3A. A) Expression of 3A protein detected by using a rabbit
antiserum to 3A and a secondary anti-rabbit Alexa 456-coupled antibody.
B) Actin filaments detected with phalloidin coupled to Alexa-488.
Figura 2. Subpoblaciones de linfocitos T porcinos inducidos en animales vacunados con el VFA. Citometría de flujo de PBMC estimuladas
in vitro con péptidos que contienen el sitio antigénico A del VFA y un epítopo T en VP4. En rojo se muestran los niveles de fluorescencia
correspondientes al receptor de interleuquina-2 (CD25) en células que expresan distintos marcadores. En gris se indican los valores en
células no estimuladas. Las células CD4+CD8+ son las mayoritariamente estimuladas.
Figure 2. Identification of the T cell subpopulations responding to stimulation of FMDV vaccinated pigs with a tandem peptide containing
antigenic site A and a T cell epitope in VP4. IL-2 receptor (CD25) was measured on cells expressing different markers. The red histograms
show the CD25 expression. Light grey histograms show the labelling on the lymphocytes sub-populations in control unstimulated cultures.
CD4+CD8+ cells are those mostly stimulated.
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