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PCR (Polymerase Chain Reaction)
La PCR è una tecnica che prevede l’amplificazione di una sequenza di DNA di cui si conoscono gli estremi.
Per realizzarla si ha bisogno di:
- Sequenza da amplificare
- nTP (nucleoclosidi tri fosfati, come ATP, cTP, GTP, TTP)
- Primer (Sequenze complementarie agli estremi della sequenza da amplificare
- TAQ (una polimerasi estratta da un termofilo, in grado di non denaturarsi ad alte temperature)
- Buffer (i tamponi necessari per la reazione di elongazione)
La PcR avviene in una serie di cicli composti da tre fasi:
- nella prima abbiamo la separazione dei frammenti, fase che avviene ad alte temperature
- una fase di Annealing, appaiamento, in cui i primer si appaiono a filamenti
- a fase in cui la TAQ polimerasi sfruttando l’OH libero fornito dai primer, polimerizza usando come stampo la
sequenza.
Nel primo ciclo si ha una duplicazione dal primer fino alla fine del frammento, ma ne cicli successivi si ha la
amplificazione della sola sequenza compreso tra i due primers.
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