Dekweekvanalikruiken - HZ University of Applied Sciences

Bijlagen
Bijlage 3 Methode biomassabepaling biofilm
Chlorofylbepaling en drooggewicht
Chlorofylbepaling:
Een bekend oppervlakte plaat met aangroei is geplaatst in een bekend volume
gefiltreerd zeewater (V 0). De aangroei is m.b.v. een spatel eraf geschraapt en de
suspensie is gefiltreerd over een Whatmanfilter d.m.v. een vacuümpomp. Het filter is
in een afsluitbare fles gedaan met 25 ml 100% ethanol en 15 minuten geplaatst in een
bak met ultrasone golven. Vervolgens is de fles 5 minuten in een waterbad van 80 o C
geplaatst waarbij iedere halve minuut de fles geschud werd. De fles is daarna
afgekoeld onder stromend water. De inhoud is gefiltreerd over een vouwfilter in een
maatcilinder. Het volume in de maatcilinder is vervolgens aangevuld tot 50 ml met
100% ethanol (V 1 ).
Met een spectrofotometer zijn hiervan de extincties (in een glazen cuvet) met 100 %
ethanol als referentie gemeten op 750 nm (E 0 ) en 665 nm (E x ).
Vervolgens is 30 ml uit de cilinder aangezuurd met 0,4 M HCl (1 ml per 10 ml, dus in
dit geval was dat 3 ml). Na 5 minuten zijn wederom de extincties gemeten op dezelfde
golflengten, nu met het aangezuurde ethanol als referentie (E 1 0 en E 1 x )
Met behulp van de volgende formule is het chlorofyl-α gehalte berekend:
V1
296 ⋅ (E q
− E
z
) ⋅ ⋅l
V0
Chl −α =
A
Waarbij:
2
Chl-α = chlorofylgehalte in mg/cm
E q = E x (665nm) – E 0 (750nm) (voor toevoeging HCl)
E z = E 1 1
x – E 0 (na toevoeging HCl)
296 = omrekeningsfactor
l = lengte van lichtweg cuvet in mm (=10mm)
A = oppervlakte gebruikte plaat in cm 2
V = volume in liter
Drooggewicht:
Het monster (stukje plaat met aangroei) is geplaatst in gefiltreerd zeewater. De
aangroei is m.b.v. een spatel eraf geschraapt en de suspensie is gefiltreerd over een
voorgewogen Whatman GF/C filter (W 0 ) d.m.v. een vacuümpomp. (De nominale
maaswijdte van een Whatman GF/C filter is 1,2 µm). Het filter is vervolgens 24 uur in
o
de droogstoof van 80 C geplaatst. Daarna is het filter wederom gewogen (W x ) m.b.v.
een analytische weegschaal. Het filter is nadien nog gedurende 1 uur verast bij een
temperatuur van 400 o C en na afkoeling is hiervan het asgewicht (Wz) bepaald.
( W
x
−W0
) − ( Wz
−W0
)
AFDW =
A
Waarbij:
2
DW
= drooggewicht in g/cm
W x = gewicht filter + residu in g
W 0 = gewicht filter in g
W z = gewicht filter + verast residu in g
A = oppervlakte gebruikte plaat in cm
2
70