ГОСУДАРСТВЕННОЕ МЕДИЦИНСКОЕ УЧЕБНОЕ ЗАВЕДЕНИЕ

Фосфорорганические соединения (ФОС, фосфакол) являются необратимыми
ингибиторами холинестеразы и ацетилхолинестеразы, поскольку ковалентно
связываются с активным центром фермента и тормозят его активность. Препараты
ФОС являются высокотоксичными ядами для насекомых (пестициды) и теплокровных
животных. Механизм тормозного действия заключается в связывании с ОН-группой
серина в активном центре фермента.
Рост концентрации ионов Са 2+ в нервном окончание является непосредственным
биохимическим сигналом, что активирует выход ацетилхолина через
пресинаптическую мембрану, его взаимодействие с холинорецепторами
постсинаптической мембраны и расщепления медиатора в синаптической щели
ацетилхолинестеразой. Поэтому ионы кальция являются мощным активатором
холинестеразы.
Метод количественного определения холинестеразы основан на титровании
щелочью уксусной кислоты, что высвободилась в процессе гидролиза ацетилхолина.
Количество щелочи, которое израсходовано на титрование является мерой
активности фермента.
Ход работы. Три пробирки заполняют реактивами по таблице.
Содержание пробирок
№ пробирки
1 2 3
Сыворотка крови, мл 0,5 0,5 0,5
Раствор CaCl 2 , капель --- 5 ---
Раствор фосфакола, капель --- --- 5
Инкубация при комнатной температуре, 5 минут
2%-ной раствор ацетилхолина 1,5 1,5 1,5
Инкубация 10 минут
Фенолфталеин, капель 2 2 2
Количество 0,1 М NaOH,
которое израсходовано на
титрование
По результатам проведенного эксперимента сделать выводы.
Тема 4. Медицинская энзимология.
Актуальность темы.
Уменьшение концентрации или полное отсутствие какого-нибудь фермента в
живой системе является результатом генетической неспособности к его биосинтезу и
проявляется специфической патологией. В настоящее время известно около 150
таких энзимопатий (в обмене простых и сложных белков, в обмене углеводов, липидов
и азотистых оснований).
Изменение активности ферментов в тканях может служить критерием
биохимической диагностики, а изучение динамики этих изменений указывает на
эффективность лечения.
Чистые ферменты и их смеси широко используются как лекарственные препараты
в терапии, хирургии, офтальмологии и других областях медицины.
Цель и исходный уровень знаний.
Общая цель.
Объяснить изменения хода ферментативных процессов и накопления
промежуточных продуктов метаболизма при врожденных (наследственных) и
приобретенных пороках метаболизма – энзимопатиях.
11