ГОСУДАРСТВЕННОЕ МЕДИЦИНСКОЕ УЧЕБНОЕ ЗАВЕДЕНИЕ

Индивидуальная самостоятельная работа студентов.
Подготовить реферативное сообщение по теме:
1. Энзимопатология.
2. Энзимодиагностика заболеваний миокарда, печени.
3. Энзимотерапия.
Алгоритм лабораторной работы.
Количественное определение активности АсАТ и АлАТ в сыворотке крови.
Принцип метода: определяется оптическая плотность раствора гидразона
кетоглутарата и пирувата, которые образуются при взаимодействии аланина (или
аспартата) с кетоглутаратом. Определение проводят в 1 см кювете при длине волны λ
– 500-530 нм. При определении АсАТ – пируват образуется путем
декарбоксилирования оксалоацетата.
Реактивы:
1. Эталонные 2 мМ раствора пирувата.
2. 1 мМ раствор 2,4-динитрофенилгидразина в 1 М НCl.
3. Раствор NаОН (16 ч. в 1000 мл Н 2 О).
4. Субстрат АсАТ: а) 0,1 мМ раствор аспартата;
б) 0,2 мМ раствор кетоглутарата;
в) фосфатный буфер рН-7,4.
5. Субстрат АлАТ: а) 0,2 мМ раствор аланина;
б) 0,2 мМ раствор кетоглутарата;
в) фосфатный буфер рН-7,4.
Реактивы,
последовательность
действия
Определение активности АсАТ.
Опытная проба
Контроль
Реактив 4 0,25 мл 0,25 мл
Физраствор --- 0,05 мл
Сыворотка крови 0,05 мл ---
Инкубация до 60 мин.
При t = 23 о С + +
Реактив 2 0,25 мл 0,25 мл
Перемешиваем и
оставляем на 20 мин.
+ +
при t = 23 о С
Раствор щелочи 2,5 мл 2,5 мл
Перемешиваем и через 10 мин. определяем оптическую плотность опытной
пробы против контроля в кювете 1см при длине волны λ – 500-530 нм.
Определение активности АлАТ проводят по той же схеме, но вместо реактива 4,
берут реактив 5.
Для расчета активности строят калибровачный график с растворами 1 и 2.
В сыворотке крови здорового человека активность:
АсАТ = 0,1 – 0,45 мМ / г / л
АлАТ = 0,1 – 0,68 мМ / г / л
13