ГОСУДАРСТВЕННОЕ МЕДИЦИНСКОЕ УЧЕБНОЕ ЗАВЕДЕНИЕ

Метод определения активности цитохромоксидазы основан на способности
диметилпарафенилендиаминхлорида (ДПФД) быть донором электронов для
цитохрома с. ДПФД неферментативно восстанавливает цитохром с, а сам окисляясь,
превращается в красный пигмент, количественное образование которого является
пропорциональным активности цитохромоксидазы митохондрий.
Ход работы. Две пробирки: контрольную и опытную заполняют реактивами по
таблице:
Содержание пробирок
Пробирка
Контрольн
ая
Опытна
я
Фосфатный буфер, рН = 7,4 1,0 мл 1,0 мл
Раствор цитохрома с 2 капли 2 капли
Суспензия митохондрий 0,5 мл 0,5 мл
Раствор ДПФД 0,5 мл 0,5 мл
Этиловый спирт 1,0 мл ---
Физраствор --- 1,0 мл
Инкубация в термостате 5 мин. при 37 о С
Результаты: появление красной окраски
Добавление этилового спирта инактивирует цитохромоксидазу и ферментативное
превращение цитохрома с. Пробирки помещают в термостат на 5 минут при 37 о С и
наблюдают за появлением красной окраски.
По результатам проведенного эксперимента сделать выводы.
Тема 9. Исследование гликолиза – анаэробного окисления
глюкозы. Глюконеогенез.
Актуальность темы.
Освобождение энергии солнца, аккумулированной в химических связях глюкозы,
начинается при гликолизе в реакции субстpатного окислительного
фосфоpилирования. В этом процессе часть энергии глюкозы трансформируется в
энергию макроэргических фосфатных связей, которые используются на ресинтез АТФ,
то есть форму энергии, доступную для использования всеми тканями при выполнении
разных видов работы (синтеза, механической, транспорта веществ через мембраны).
При напряженной работе мышц временно возникают анаэробные условия, и тогда
основным процессом, что обеспечивает энергией мышцы, становится гликолиз –
анаэробное окисление глюкозы. В норме конечный продукт гликолиза – молочная
кислота, - быстро ресинтезируется в печени в глюкозу и гликоген и частично
окисляется.
Многие заболевания сопровождаются гипоксией тканей (сердечно-сосудистые
заболевания, заболевания легких и др.), что приводит к накоплению в тканях
молочной кислоты, развитию ацидоза, и, соответственно, расстройству обмена
веществ и функций органов. Определение молочной кислоты в крови является тестом
для оценки интенсивности гликолиза. Гиперлактатемия – маркер блока аэробных
путей окисления глюкозы.
Цель и исходный уровень знаний.
21