Untersuchungen zum Vorkommen und zur gesundheitlichen ...

2.3.5.3 Gram-Färbung
Die Gram-Färbung stellt ein wichtiges Differenzierungsverfahren dar, mit dessen
Hilfe die Bakterien in zwei Gruppen unterteilt werden können, die sich in ihrer
Zellwandstruktur unterscheiden.
Actinomyceten gehören zu den grampositiven Mikroorganismen. Nach Isolation der
Stämme wurde zunächst diese Differenzierungsfärbung durchgeführt.
Es wurden gebrauchsfertige Lösungen der Firma Becton Dickinson eingesetzt.
Färbemethode:
Präparate hitzefixieren
Färben: Überschichtung mit Kristallviolett
(Präparate vollständig mit Färbelösung bedecken)
1 min einwirken lassen, Färbelösung abgießen
Beizen: mit Lugol'scher Lösung abspülen, abschütten
anschließend erneut mit Lugol'scher Lösung überschichten, 1 min
einwirken lassen
Differenzieren: mit 96 % Alkohol spülen, bis keine Farbwolken mehr abgehen, mit
Wasser nachspülen
Gegenfärbung: Safranin-Lösung auftropfen
nach 1 min mit Wasser abspülen
Präparat trocknen
Bei der mikroskopischen Betrachtung erscheinen gramnegative Mikroorganismen rot,
die grampositiven dagegen blau bis violett.
2.3.5.4 Bestimmung der Diaminopimelinsäure (DAP)
Die Struktur des Peptidoglycans ist bei den Gram-positiven Bakterien ein wichtiges
Merkmal für die Gattungsdiagnose. Bei den Actinomyceten ist die für die Vernetzung
des Peptidoglycans verantwortliche Diaminosäure des Tetrapeptids und die Struktur
der Interpeptidbrücke ein charakteristisches Merkmal. Weit verbreitet ist bei
Actinomyceten das Vorkommen eines der Isomere der Diaminopimelinsäure (LLbzw.
meso-DAP), sie wird daher bei den Actinomyceten auch als
Schlüsseldiaminosäure bezeichnet. Deshalb ist die DAP-Bestimmung immer der
erste Schritt in der Zellwandanalyse, dessen Ergebnis bereits Hinweise auf
bestimmte Gruppen innerhalb der Ordnung Actinomycetales sowie auf weitere
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