Untersuchungen zum Vorkommen und zur gesundheitlichen ...

Dietzia, Corynebacterium, Gordonia, Dietzia, Tsukamurella) und den Gattungen ohne
Mycolsäuren (Amycolatopsis und verwandte Gattungen). Die Untersuchung der
Mycolsäurekettenlängen differenziert zwischen Mycobacterium mit über 80 C-
Atomen, Nocardia mit über 50 C-Atomen und Corynebacterium mit etwa 30 C-
Atomen.
Für die Analyse wurden 100 mg Biotrockenmasse in einem hitzestabilen Röhrchen
(Schott Schraubröhrchen) mit 5 ml trockenem Methanol, 5 ml Toluol und 0,2 ml
konzentrierter Schwefelsäure versetzt und für 16 Stunden auf 50 °C erwärmt. Nach
erfolgter Hydrolyse wurden die Mycolsäuren durch Zugabe von 3 ml Hexan
extrahiert. Die obere Hexanphase wurde abgenommen, in ein neues Röhrchen
überführt und unter Zugabe von je einer Spatelspitze Ammoniumhydrogencarbonat
und Natriumsulfat gereinigt und getrocknet. Der Überstand wurde abgenommen und
bis zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde in 30 µl Chloroform/Methanol-
Gemisch (3:1 v/v) aufgenommen und auf eine Kieselgelplatte aufgetragen (HPTLC
silica plates 60, Fa Merck). Die Platte wurde zwei Mal im Laufmittel Hexan, Äther,
Toluol und Essigsäure (35 ml+7,5 ml+ 7,5 ml+0,5 ml) entwickelt. Anschließend wurde
die Platte in ein Chromatographiegefäß mit Jod gestellt; die Mycolsäuren wurden
durch die Joddämpfe braun gefärbt. Als Referenz diente der Typusstamm der
Spezies Rhodococcus rhodochrous IMET 7374 T .
2.3.5.6 Bestimmung von Enzymmustern mit dem API-ZYM-System
Das API ZYM-Testsystem der Firma bioMerieux ermöglicht den Nachweis von 19
enzymatischen Reaktionen bei Mikroorganismen. Mit dem API ZYM-Testsystem ist
allerdings keine Identifizierung der Actinomyceten möglich. Es wurde genutzt, um zu
klären, ob Isolate, die von unterschiedlichen Nährmedien gewonnen wurden, ein
identisches Enzymbildungsmuster zeigten.
Entsprechend der Vorschrift wurden Zellen von der Agaroberfläche abgenommen, in
0,9% Kochsalzlösung suspendiert und eine definierte Zelldichte eingestellt. Diese
Suspension wurde in die Mikroröhrchen der Teststreifen pipettiert. Nach
vierstündiger bzw. 24-stündiger Inkubation bei 28 °C wurde die Reaktion abgelesen
und entsprechend den Herstellerangaben bewertet.
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