Untersuchungen zum Vorkommen und zur gesundheitlichen ...

Freisetzung, die mit der Positivkontrolle (LPS, Stachybotrys chartarum 10 7 )
vergleichbar war. Daher und aufgrund der zu erwartenden Sporenkonzentrationen in
der kontaminierten Innenraumluft wurden nur Konzentrationen von 10 2 und 10 3 in die
Tests mit einbezogen.
2.5.2.2 Zellkulturen
Die Lungenzellen (Bronchialepithelzellen, A 549) und Makrophagen (RAW 264.7)
wurden in DMEM 1g Glukose/L (Biochrom, Cat. Nr. F0415), bzw. DMEM 4,5g
Glukose/L (Lonza, Cat. Nr. BE 12-614F) angezüchtet. Vor jedem Versuchsansatz
wurden während der routinemäßigen Passagierung Zellen in Reaktionsgefäße
überführt, auf eine Konzentration von 106 Zellen je ml eingestellt und neues Medium
zugesetzt.
2.5.2.3 Durchführung des Zellkulturtests
Zu je 1 ml Zellsuspension (10 6 Zellen) wurde 1 ml einer entsprechend konzentrierten
Konidien- bzw. Sporensuspension zugesetzt. Diese Ansätze wurden über 24 h
inkubiert. Anschließend wurden die Überstände abgenommen, um daraus die
Interleukin-Konzentration zu bestimmen; die Zellen wurden einer Färbung (Trypan-
Blau Färbung) unterzogen, um den Anteil der lebensfähigen Zellen festzustellen.
2.5.2.4 Auswertung des Zellkulturtests
Aus den Überständen wurden die Interleukin-Konzentrationen mittels eines ELISA
(Firma BD, Cat. No. 550610) bestimmt. Die Messungen wurden exakt nach den
Anleitungen der Firma BD durchgeführt, die auf der Internetseite der Firma online
verfügbar sind
(http://www.bdbiosciences.com/external_files/pm/doc/manuals/live/web_enabled/01-
81014-550950-C.pdf). Anhand von 6 Standardkonzentrationen wurde eine
Kalibration durchgeführt. Als Negativkontrolle wurde der Zellüberstand einer Probe
ohne biogene Noxen eingesetzt, als Positivkontrolle wurden zunächst Stachybotrys
chartarum und E. coli, im späteren Verlauf der Experimente reines Lipopolysaccharid
(LPS: 15 µg/ml) eingesetzt.
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