Technische Universität München Wissenschaftszentrum ...

Material und Methoden 49
wurden dann in Reaktionsgefäßen (Eppendorf, Hamburg, BRD) bei –80°C
konserviert und zur Analyse aufgetaut.
Die Messung der Enzymaktivität erfolgte für ALP, AST und ALT nach der
„Optimierten Standardmethode“ der DEUTSCHEN GESELLSCHAFT FÜR KLINISCHE
CHEMIE (1970 UND 1972), für ?-GT wurde auf eine von PERSJIN und VAN DER SLIK
(1976) beschriebene Methode zurückgegriffen. Da speziell für Schweineblut keine
Test-Kits vorhanden sind, wurden auf Humanseren geeichte Testsysteme (Fa. Roche
Diagnostics GmbH, Mannheim, BRD) verwendet, die laut Hersteller auch für
Probenmaterial vom Schwein eine ausreichend hohe Messgenauigkeit aufweisen.
Den gebrauchsfertigen Test-Kits wurde in einer Halbmikro-Küvette (Fa. Brand,
Wertheim, BRD) das entsprechende Probenaliquot zugesetzt, anschließend erfolgte
die photometrische Messung der Extinktion gegen den Leerwert jeweils genau 1, 2
und 3 Minuten nach der Probenbeimischung. Als Messgröße diente die Extinktionsveränderung
pro Zeiteinheit, die der Geschwindigkeit der Substratspaltung und damit
der Enzymaktivität proportional war. Aus dem Mittelwert der Extinktionsdifferenzen
pro Minute konnte dann für das entsprechende Enzym mit einer Formel die Aktivität
in I.U./ l (= International Units/l; 1I.U. = 16,67nkat) berechnet werden.
Pro Plasmaprobe wurden mindestens zwei Messungen durchgeführt, die verwendete
Wellenlänge am Spektralphotometer (Modell Uvikon 933, Fa. Kontron, Eching, BRD)
lag je nach Enzym bei 365 bzw. 405 nm.
Die Aktivität dieser vier Plasmaenzyme wurde im Rahmen der klinischen
Untersuchungen sowohl bei den Zuchtsauen und ihren Ferkeln, als auch bei den
Ferkeln im Ferkelversuch I ermittelt.
3.6.4.4 Rotlauf-Antikörpertiter im Plasma
Die Rotlauf-Antikörpertiter (Rotlauf-IgG) wurden nur bei den Mastschweinen aus dem
Blutplasma bestimmt. Zur Gewinnung des Plasmas musste das heparinisierte
Vollblut zunächst zentrifugiert werden (1650g, 5 min), so dass der Plasmaüberstand
abgenommen werden konnte. Das Plasma wurde anschließend in Reaktionsgefäßen
(Fa. Eppendorf, Hamburg, BRD) bei –80°C bis zur Analyse konserviert Die
Bestimmung der spezifischen Antikörpertiter erfolgte durch das LANDESUNTER-
SUCHUNGSAMT FÜR DAS GESUNDHEITSWESEN SÜDBAYERN in Oberschleißheim mittels