Reinigungsleistung von Membranbelebungsanlagen bezüglich ...

Reinigungsleistung von Membranbelebungsanlagenbezüglich hygienischer Parameter Seite 395.4.2.3 Durchgeführte TestreihenWasserproben der VersuchsanlageDie Experimente wurden entsprechend dem Protokoll vom MARON und AMES (1984) alsPlatteninkorporation Tests durchgeführt. Von Übernachtkulturen, die sich in der stationärenWachstumsphase befanden wurden 0,2 ml (1-4 10 8 Zellen) mit unterschiedlichen Mengen desTestwassers (100-500 µl), 0,5 ml PBS und 2,0 ml Top-Agar auf Selektivagarplatten aufgebrachtund diese 2 Tage in Dunkelheit bei 37°C inkubiert. Nachfolgend wurde die Zahl der his +Revertanten durch manuelle Zählung ermittelt.In den Experimenten mit metabolischer Aktivierung wurde die gepufferte Kochsalzlösung durchaliquote Mengen S-9 mix (0,5 ml/Platte) ersetzt. Pro Messpunkt wurden drei Platten hergestellt. Inallen Experimenten wurden Positivkontrollen mitgeführt. S-9 wurde sowohl entsprechend demStandard Protokoll als auch in konzentrierter Form zubereitet (Details siehe MARON und AMES,1984).Vakuumdestillation-angereicherte Proben (03.02.2009)Die Untersuchungen wurden in identer Weise durchgeführt, wie die Tests mit nichtangereichertenProben. Die Abwässer wurden mittels Rotavapor (Buchi, Schweiz, 45 ºC, 4000 rpm) 4- und 8-fachangereichert. Die angereicherten Proben wurden nachfolgend direkt in den Bakterientestsuntersucht.Säulenangereicherte Proben (10.01.2008, 16.01.2008, 28.01.2008 und 29.01.2008)Die Konzentration der Wasserproben erfolgte entsprechend dem Protokoll von PETALA et al.(2008) mit geringfügigen Modifikationen. Insgesamt wurden 8 Liter der nativen Proben für 25 minmit 4000 rpm zentrifugiert. Nachfolgend wurden die Überstände gefiltert (0,45 µm, VWR, Austria).Entsprechend der standardisierten Prozedur nach US-EPA (1994) wurden die Wasserproben mit6 N HCl angesäuert (pH 2,0), und nachfolgend mit C18 Säulen (Sep-pak tC18, Env. Cartridges,Waters, 0,9 g/Säule) angereichert. Die Säulen wurden mit organischen Lösungsmitteln in derReihenfolge 5 ml Ethylacetat, 10 ml Methanol und 10 ml aqua dest. prä-aktiviert. Nachfolgendwurden jeweils 2 Liter Wasser pro Säule mit einer konstanten Durchflussrate von 5 ml/mindurchgeleitet. Die Säulen wurden mit 5 ml Ethylactetat eluiert, gefolgt von 5 ml Methylenchloridund 5 ml Methanol. Die Eluate wurden mittels Rotavapor (Buchi, Schweiz) aufkonzentriert (38°C,120 rpm) und in DMSO aufgenommen (finales Volumen 6,0 ml).„Blue Cotton“-angereicherte Proben (05.02.2010)Dieses Verfahren wurde in den 1980er Jahren von SAKAMOTO und HAYATSU (1990) entwickelt,und beruht auf der Adsorption von planaren Verbindungen wie Nitroaromaten, heterozyklischenaromatischen Aminen und polyzyklischen aromatischen Kohlenwasserstoffen an einemkupferhaltigen Phethalozyaninkomplex. Diese Methode wurde sehr erfolgreich beiWasseruntersuchungen eingesetzt (SAKAMOTO und HAYATSU, 1990; KATAOKA et al., 2000), undwurde hier verwendet, da anzunehmen war, dass die getesteten Wässer (eine Mischung ausKommunalabwasser und WC-Abwasser) Verbindungen enthalten die sich an „Blue Cotton“binden.Die Durchführung der Anreicherung erfolgte wie von HAYATSU et al. (1989) beschrieben. Dazuwurden Netze mit „Blue Cotton“ (Funakoschi Chemicals, Tokyo) gefüllt (0,5 g/Netz) und für48 Stunden im Belebungsbecken und den beiden Permeatablauftanks exponiert. Nachfolgendwurden sie mit destilliertem Wasser gewaschen, getrocknet, und mit 50:1 Methanol/Ammoniakeluiert. Nach Verdampfung des Lösungsmittels im Rotavapor (bei 25 ºC) wurden die Rückständein DMSO gelöst und in den Bakterientests untersucht.Endbericht Kapitel 5 April 2010