PDF Download - Laborwelt

in der Lage, die exogene Genexpression
sowie transkriptionelle Regulation und
Signaltransduktion darzustellen und zu
quantifizieren. Die Expression des Reporters
ist abhängig von der Wahl des jeweiligen
Promotors beziehungsweise Enhancer-
Elements, unter dessen Kontrolle sich das
Reportergen befindet. So kann zum Beispiel
B L I T Z L I C H T
die gewebespezifische Genexpression oder
Regulation untersucht werden. Beispiele dafür
sind die nicht-invasive Darstellung des
PET-Markergens HSV-1-tk unter Kontrolle
des Albuminpromotors 4 beziehungsweise
die transkriptionelle Regulation durch p53 5 .
In diesem Zusammenhang ist das nicht-invasive
Imaging des Transkriptionsfaktors
Abb. 3: Bildliche Darstellung von HSV-1-Amplikonvektor-vermittelter
Genexpression der
viralen Thymidinkinase (HSV-1-tk). Nacktmäusen
mit je zwei Gli36ΔEGFR-wt-Tumoren sowie
einem stabil Thymidinkinase-exprimierenden
Tumor (p.c. Gli36ΔEGRF-TG17) wurde der HSV-
Amplikonvektor HSV-TIG injiziert. Einer der
beiden wt-Tumore wurde so in vivo transduziert,
wohingegen der zweite als Negativkontrolle
(n.c.) fungierte (Mikrofotografie). In der transaxialen
bildlichen Darstellung der dazugehörigen
FHBG-PET-Aufnahme zeigt sich eine Akkumulation
des Radioaktivsignals zum einen in der
Positivkontrolle, zum anderen um die Injektionsstelle
des HSV-Amplikonvektors (aus [6]).
E2F1, dessen Expression in den meisten
Gliomen dereguliert ist, ein weiteres Forschungsprojekt
unserer Arbeitsgruppe.
Gentherapeutische Strategien
und begleitendes Imaging
In experimentellen Gentherapiestudien,
in welchen HSV-1-Amplikonvirione als
Vektoren zum Einschleusen der viralen
Thymidinkinase genutzt wurden, konnten
durch proportionale Koexpression eines therapeutischen
Gens indirekte Aussagen zur
Expression des Zweitgens getroffen werden 6 .
Dazu wurden HSV-1-Amplikonvektoren direkt
in subkutane Tumore (Gli36ΔEGFR) von
Nacktmäusen injiziert. Imaging der HSV-1-
TK erfolgte mittels FHBG-PET, dabei stellt
[ 18 F]FHBG (9-(4-[18F]fluoro-3-hydroxymethylbutyl)guanine)
das spezifische Substrat
der viralen Thymidinkinase dar (Abb. 3).
� Fortsetzung S. 21
Abb. 4: Die Regulation von Genexpression
wurde mit verschiedenen Techniken untersucht.
In Zellkultur wurden Gliomzellen mit
einem induzierbaren HSV-Amplikonvektor
infiziert, der das fluoreszierende Protein RFP
regulierbar exprimiert. Genexpression von rfp
wurde mittels Fluoreszenzmikroskopie in An-
und Abwesenheit des Regulators Doxyzyklin
untersucht. In Gegenwart von Doxyzyklin
konnten RFP-positive Zellen nachgewiesen
werden. In vivo konnte eine regulierbare Genexpression
von HSV-1-tk sowie firefly luciferase
durch nicht-invasives Imaging mit Hilfe
von [ 18 F]FHBG-PET und optischem Imaging
durch Biolumineszenz von Luciferase dargestellt
werden 10 .
18 | 6. Jahrgang | Nr. 6/2005 LABORWELT