ciencias de la vida

Técnicas
al servicio de
la investigación
Para determinar la muerte de fotorreceptores
en los cultivos de
retina el equipo de investigación
utilizó técnicas morfológicas y moleculares.
Aunque estas últimas
muestran mayor sensibilidad que
las morfológicas, las técnicas moleculares,
al obtener un extracto
o suspensión de las células del
tejido, pierden toda la información
relativa a la localización.
Entre las técnicas morfológicas
destaca TUNEL (Terminal dUTP
Nick End Labeling; marcaje de
los extremos cortados del ADN)
que se aplica desde hace más de
20 años y permite la detección
de células en degeneración en el
microscopio.
Entre las moleculares se encuentran
Western blot, cuya función es
detectar proteínas específicas, y
la PCR, que amplifican secuencias
determinadas de ADN o ARN.
Además, para cuantificar los productos
liberados por la microglía
en estado de activación, se utilizó
ELISA (Enzyme-Linked Immunoabsorbent
Assay), una técnica muy
sensible para determinar la presencia
de un antígeno, una molécula
que provoca una respuesta
inmunitaria y la formación de anticuerpos,
en un extracto celular o
en la parte líquida de un cultivo.
paración del ADN, determina la migración
de las células microgliales e
interviene en su activación. Por ello,
el equipo intentará interferir en la
función microglial, ya sea utilizando
retinas de ratones que carecen del
gen que codifica PARP (y que, por
tanto, no pueden sintetizarlo) o mediante
inhibidores farmacológicos
que impiden que la enzima desarrolle
su función normal.
El profesor Cuadros indica que el
uso de explantes permite un mayor
control del tratamiento, dado que
La microglía es una de
las pocas aportaciones
españolas al vocabulario
médico-biológico
internacional. Pío del
Río Hortega, que trabajó
con el Doctor Ramón y
Cajal, fue quien diferenció
claramente la microglía, en
1919, de las otras células
gliales y les dio su nombre
actual, aunque también se
las conoció como “células
de Hortega”. En 1985 V.
Hugh Perry pudo respaldar
la teoría de del Río acerca
de la función macrófaga,
o de eliminación de restos,
de estas células.
resulta más sencillo realizar experimentos
en cultivos. Además, en
los fragmentos de tejido es posible
eliminar variables para estudiar su
incidencia en la muerte de fotorreceptores
que no se pueden realizar
en el animal vivo. Por ello, algunas
de las variables estudiadas pueden
modificarse según se realicen los experimento
en roedores o en cultivos,
pero, en palabras del profesor, “la
utilización de explantes es un buen
indicador de lo que puede pasar en
el ratón”, aunque, indica, la conclusión
final debe obtenerse siempre a
partir de la experimentación in vivo.
En la actualidad, el equipo de
Biología Celular de la UGR trabaja
en la eliminación de las células microgliales
en explantes de retina. Si
logran eliminar la microglía obtendrán
datos de alto interés acerca de
su influencia en la degeneración retiniana.
Además, este hito permitirá
identificar si existen mecanismos
alternativos que influyan y/o desemboquen
en la muerte de fotorreceptores,
premisa que el equipo no
descarta.
“Aunque tenemos indicios de que
la activación de la microglia de la retina
puede contribuir a la degeneración
de fotorreceptores, esta opción
sigue siendo una hipótesis de trabajo
y no podemos decir que este confirmada
al 100%”, afirma el profesor
Cuadros. Dos argumentos apoyan
su tesis: con el uso de minociclina
(antibiótico que impide la activación
microglial y tiene un efecto anti-inflamatorio)
y con la inhibición de la
enzima PARP (implicada en la movilización
de las células microgliales),
se produce un incremento de la
viabilidad de las células de la retina.
Pero aún se desconoce si el efecto es
transitorio o estable. Si logran eliminar
la microglía de los explantes
se podrá demostrar si estas células
pueden favorecer la degeneración
de las células del ojo.
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