Prevalência de resistência a antimicrobianos em isolados ...

Prevalência de resistência a antimicrobianos em isolados ambientais de Escherichia coli e enterococos
2.1.2.5.Solução de ciprofloxacina (CIP)
A solução stock de CIP foi preparada a 4µg/µL a partir de 4mL de Roxacin® num
volume de 100mL de água destilada. A solução foi filtrada e posteriormente preservada
à temperatura de -20ºC.
2.1.2.6. Solução de vancomicina (VAN)
A solução stock de VAN foi preparada a concentração 6mg/mL.
2.1.3 Soluções stock e tampões de pH
2.1.3.1.Ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) 0.5M, pH 8.0
O EDTA é um ácido poliprótico utilizado em várias soluções amortecedoras de pH.
Este atua como agente quelante de iões divalentes o que previne a ocorrência de reações
intermoleculares e consequentemente a desnaturação do DNA.
Para a sua preparação adicionaram-se 46,5g de EDTA (Merck) e 5.0g de NaOH pellets
(Analar NORMAPUR) em 100mL de água. A solução foi aquecida a 50ºC com agitação
magnética. Os valores de pH foram aferidos com a adição de uma solução 10N NaOH.
Perfez-se o volume até 250mL com água destilada e posteriormente foi autoclavada a
121ºC durante 15 minutos.
2.1.3.2. Cloreto de sódio (NaCl) 5M
O NaCl é um composto iónico utilizado juntamente com o etanol em processos de
extração de DNA para obtenção de uma maior eficácia na precipitação dos ácidos
nucleicos. A solução 5M NaCl foi preparada com 29,2g de NaCl (CARLO ERBA) em
100mL de água destilada. Para dissolução mais eficaz efetuou-se aquecimento a 50ºC
com agitador magnético. Posteriormente foi autoclavada a 121ºC durante 15 minutos.
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