Prevalência de resistência a antimicrobianos em isolados ...
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<strong>Prevalência</strong> <strong>de</strong> <strong>resistência</strong> a <strong>antimicrobianos</strong> <strong>em</strong> <strong>isolados</strong> ambientais <strong>de</strong> Escherichia coli e enterococos<br />
2.1.3.6. Sódio-Tris-EDTA (STE)<br />
O tampão <strong>de</strong> STE foi preparado a partir <strong>de</strong> 10mM <strong>de</strong> Tris-HCl (pH 8.0), 1mM <strong>de</strong><br />
EDTA (pH 8.0) e 0,1 M NaCl. Posteriormente foi autoclavada a 121ºC durante 15<br />
minutos.<br />
2.1.3.7. Tris (hidroximetil) aminometano (TRIS-Cl) 1M; pH 8.0<br />
A solução 1M Tris-HCl foi preparada com a dissolução <strong>de</strong> 30,3g <strong>de</strong> base Tris (Merck)<br />
<strong>em</strong> 100mL <strong>de</strong> água. Ajustou-se o pH através da adição <strong>de</strong> 10,5mL <strong>de</strong> ácido clorídrico<br />
concentrado (HCl). A solução arrefeceu antes <strong>de</strong> se proce<strong>de</strong>r a ajustes finais <strong>de</strong> forma a<br />
obter pH 8.0. O volume foi ajustado até 250mL com água <strong>de</strong>stilada. A solução foi<br />
autoclavada a 121ºC, durante 15 minutos.<br />
2.1.3.8. 10x TRIS EDTA (TE), pH 8.0<br />
A solução tampão 10x TE foi preparada a partir <strong>de</strong> 100mM <strong>de</strong> Tris- HCl a pH 8.0 e<br />
10mM <strong>de</strong> EDTA a pH 8.0. A solução foi autoclavada a 121ºC durante 15 minutos.<br />
2.1.3.9. Tampão TRIS-Acetato-EDTA 1 x (TAE)<br />
O tampão TAE é utilizado <strong>em</strong> eletroforese. Para a sua preparação adicionou-se um<br />
volume <strong>de</strong> 20mL <strong>de</strong> tampão 50 x TAE e completou-se o volume até 1000mL com água<br />
<strong>de</strong>stilada.<br />
2.2. Área <strong>de</strong> estudo<br />
As amostras <strong>de</strong> água do rio Douro foram recolhidas <strong>em</strong> dois pontos <strong>de</strong> amostrag<strong>em</strong><br />
<strong>de</strong>signados por Heliporto e Freixo, localizados na interface do estuário baixo e médio e<br />
no médio estuário respetivamente. Efetuaram-se amostrag<strong>em</strong> na Foz – Praia dos<br />
Ingleses e na Praia <strong>de</strong> Matosinhos (Ilustração XII).<br />
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