Prevalência de resistência a antimicrobianos em isolados ...

Prevalência de resistência a antimicrobianos em isolados ambientais de Escherichia coli e enterococos
que interfere na corrida de eletroforese devido ao baixo peso molecular gerado.
Dissolver o DNA em tampão TE, conforme a quantidade de pellet observada, tendo-se
acrescentado cerca de 30μL do mesmo.
2.7.2. Determinação da concentração e pureza de DNA por
espectrofotometria
A espectrofotometria é utilizada como método para determinar a concentração de DNA
presente numa amostra, bem como o seu grau de pureza.
O DNA apresenta grande atividade de absorvância a 260nm. A este comprimento de
onda é possível estimar-se a concentração presente na amostra. À densidade ótica (OD)
de 1 corresponde a concentração de 50μg/mL. Assim, a quantidade de DNA presente é
dada através da seguinte fórmula:
[DNA]= 50μg/mL × Diluição × A260nm
O ratio de 260/280 (OD260:OD280) possibilita a estimativa do grau de pureza dos
ácidos nucleicos da amostra. Pode ocorrer a contaminação por outros compostos como
proteínas, fenol ou RNA. No caso das proteínas o grau de contaminação teria que ser
muito significativo para induzir variabilidade nos valores de absorvância a 260nm.
Preparações com valores de OD260/OD280 entre 1,8 e 2,0. Valores abaixo podem
significar contaminação por fenol ou proteínas. São necessárias concentrações de DNA
de cerca de 1μg/mL para se obterem resultados fiáveis a A260nm (Sambrook and
Russell, 2001).
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