Forschungsprojekt Nr. 04 HS 042 Thema: Methodische ... - BLE

GPC 15
L34, – L38/3/10/11:
„Biobeads“-Gel (50g, max.1,5 g Fett)
VDLUFA VII, 3.3.2.2/3.3.5.1
Cych/Ee 1 + 1
(Cych/DCM 85 + 15)
Ausfrieren:
Anastassiades
ACN-Extr. Lsg. kühlen,
bis Fett ausfällt
fl-fl-Verteilung
L38/3 PE-Lösung (max. 5 g Fett)
+ ACN (DMF), + Wasser
Calflo, vor oder nach GPC
L34/ - E 7
5
Abbildung 3: Mögliche Verfahren zur Fettabtrennung
Alle Labore verwendeten zur Fettabtrennung die Gelpermeationschromatographie (GPC),
beschrieben als Methode L34 bzw. L38/3/10/11 der Methodensammlung nach § 35 LMBG
bzw. von VDLUFA in Band VII, 3.3.2.2 und 3.3.5.1. 50 g von z.B. Bio Beads-Gel vermögen
1,5 g Fett abzutrennen. Als Laufmittel wird eine Mischung von Cyclohexan und Essigsäureethylester
(1+1) eingesetzt, denkbar ist aber auch Cyclohexan/Dichlormethan (85+15)
oder Cyclohexan/Aceton (7+3). Das GPC-Verfahren wird meist in automatisierter Weise
durchgeführt.
Einige Labore verwendeten Calflo E im Zusammenhang mit der Methode L34-E7, das vor
oder nach der GPC zugesetzt wird und zur Fettabtrennung beiträgt.
4.2.2.2 Nachreinigung nach GPC
Die GPC ist nicht in der Lage, kleinmolekülige Substanzen, die den Messvorgang erheblich
stören können, abzutrennen. Hierzu bedarf es der Methoden der Adsorptions- und
Verteilungschromatographie.
In einem weiteren Übersichtsschema (Abb. 4) findet sich in der linken Spalte wieder die
Benennung des Verfahrens mit Literaturangaben, dann eine stichpunktartige Beschreibung,
im rechten Feld die Angabe, wie viele Labore welche Methode verwendet haben.
Die Methoden L 34-C1, C2 (AMTL.SAMMLUNG § 35 LMBG) bietet die Nachreinigung
an aktivem Kieselgel an (1 g Kieselgel, zu 1,5 % mit Wasser desaktiviert).
Moderne Verfahren der Nachreinigung sind die Nachreinigung an C18-Festphasensäulen,
die Nachreinigung an Aktivkohle und an Aminopropyl-Kieselgel, schließlich die Nachreinigung
an PSA-Kieselgel (PSA = Primary Secondary Amine). Alle diese Nachreinigungsverfahren
wurden etwa mit gleicher Häufigkeit ausprobiert, am häufigsten die Nachreinigung
mit Aminopropyl-Kieselgel.
Gemäß Vorschlag im Anschreiben zum Ringversuch wurde die Nachreinigung an Aktivkohle
oft verknüpft mit der Nachreinigung an Amino-Propyl-Kieselgel. Zusätzlich wurde
vielfach vorher an C18-Festphasensäulen eine Nachreinigung durchgeführt. Die Nachreinigung
an PSA-Kieselgel ist als eine Ersatzmöglichkeit für Amino-Propyl-Kieselgel zu sehen.
12