Effekt selektiver und nicht selektiver nichtsteroidaler Antiphlogistika ...

Material und Methoden
Aqua dest.
1 Minute
0,5 % Lithium-Carbonat bis zur Blaufärbung 45 Sekunden (in der Zeit 4 x
dippen)
Fließendes Leitungswasser
10 Minuten
96 % Ethanol zur Differenzierung 5 Minuten
100 % Ethanol 5 Minuten
Xylol I
5 Minuten
Xylol II
5 Minuten
Anschließend wurden die Proben mit Depex (Serva Electrophoresis GmbH,
Heidelberg, Deutschland) eingedeckt.
Die Biebrich-Scharlachrot-Hämatoxylin-Farblösung wurde täglich aus den drei
Stammlösungen Biebrich-Scharlachrot, Hämatoxylinstammlösung A und
Hämatoxylinstammlösung B frisch angesetzt.
3.3.4 Immunhistochemie
3.3.4.1 Calprotectin
Für die immunhistochemische Darstellung des Calprotectins wurden in Formalin
fixierte Gewebeschnitte verwendet. Nach Entparaffinieren, Überführung in das
wässrige Milieu sowie Blockierung der endogenen Peroxidase mit Hilfe von 3%igem
Hydrogenperoxid (H 2 O 2 ), wurden die Schnitte drei mal fünf Minuten in Phosphat
gepufferter Kochsalzlösung (PBS) gewaschen und anschließend für 30 Minuten bei
RT in Proteinase K (Sigma Aldrich Chemie GmbH, Steinheim, Deutschland) zur
Demaskierung des Antigens verbracht. Nach einmaligem Spülen mit PBS erfolgte
eine 20-minütige Inkubation mit normalem Ziegenserum (eigene Gewinnung), um
nichtspezifische Antikörperbindungen zu unterbinden. Die sich anschließende
Inkubation des Primärantikörpers (Anti-Calprotectin, Klon MAC387, monoklonal,
mouse IgG1, DCS Diagnostik Systeme, Hamburg, Deutschland) in einer Dosierung
von 1:400 erfolgte über Nacht im Kühlschrank (4 °C), wie in Tabelle 1 dargestellt. Am
nächsten Tag wurde nach dreimaligem Spülen in PBS der Sekundärantikörper
(Envision Mouse, DAKO, Hamburg, Deutschland) zugegeben und für 45 Minuten
belassen. Im Anschluss wurden die Schnitte mit dem chromogenen System DAB
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