Einfluss von Mutationen auf die NS2/3-Prozessierung und die ...

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ABKÜRZUNGEN VP Virusprotein % v/v Volumenprozent % w/v Gewichtsprozent wt Wildtyp zp zytopathogen ZPE zytopathogener Effekt Aminosäuren (Ein-Buchstaben-Code): A Alanin I Isoleucin R Arginin C Cystein K Lysin S Serin D Asparaginsäure L Leucin T Threonin E Glutaminsäure M Methionin V Valin F Phenylalanin N Asparagin W Tryptophan G Glycin P Prolin Y Tyrosin H Histidin Q Glutamin Nicht erklärt werden Abkürzungen und Akronyme, die Eigennamen oder Handelsmarken darstellen. X
1. Einführung EINFÜHRUNG Die vorliegende Dissertation befasst sich mit verschiedenen Aspekten der Molekularbiologie von Pestiviren. Als Pestiviren werden drei veterinärmedizinisch relevante Erreger bezeichnet. Es handelt sich dabei um das Virus der bovinen viralen Diarrhöe („bovine viral diarrhea virus“, BVDV), das Virus der klassischen Schweinepest („classical swine fever virus“, CSFV) und das „border disease“ Virus (BDV) des Schafes. Vom BVDV werden aufgrund genetischer Unterschiede zwei Typen unterschieden, die als Spezies BVDV-1 und BVDV-2 benannt werden. Wegen ihrer Genomorganisation und Expressionsstrategie werden die Pestiviren als Genus Pestivirus der Familie Flaviviridae zugeordnet, welche darüber hinaus die Genera Flavivirus und Hepacivirus umfasst (Wengler G. et al. 1995; Heinz et al. 2000). Pestiviruspartikel sind umhüllt und haben einen Durchmesser von 40-60 nm (Thiel, Plagemann, and Moennig 1996). Das ikosaedrische Kapsid, welches das virale RNA Genom enthält, hat einen Durchmesser von ca. 30 nm (Horzinek, Reczko, and Petzoldt 1967). Die lipidhaltige Hülle ermöglicht die Inaktivierung der Pestiviren mit chemischen Lösungsmitteln wie Chloroform und Ether oder mit Detergentien. Das Einwirken von UV-Strahlen, proteolytischen Enzymen, Hitze und niedrigen pH-Werten auf diese Viren führt ebenfalls zu einer Reduktion der Infektiosität (Liess 1981; Moennig V. 1988; Depner, Bauer, and Liess 1992). Das Verhalten in der Zellkultur lässt zwei Biotypen unterscheiden. Nichtzytopathogene (nzp) Pestiviren vermehren sich ohne sichtbare Veränderungen in den Kulturzellen, während zytopathogene (zp) Viren im Verlauf ihrer Replikation zu einer Lyse der Zellen führen, die man als zytopathogenen Effekt (ZPE) bezeichnet (Baker 1987). Das im Normalfall 12,3 kb lange, einzelsträngige RNA-Genom der Pestiviren liegt in positiver Orientierung vor. Es ist an seinem 3’-Ende weder polyadenyliert noch findet sich an seinem 5’-Ende eine „cap-Struktur“ (Renard et al. 1987; Collett et al. 1988a; Meyers, Rümenapf, and Thiel 1989a; Moormann et al. 1990; Deng and Brock 1992; Brock, Deng, and Riblet 1992). Die virale RNA enthält einen einzigen offenen Leserahmen, der beiderseits von nicht kodierenden Sequenzen flankiert wird und für ein Polyprotein von etwa 4000 Aminosäuren kodiert (Collett et al. 1988a; Wengler G. et al. 1995; Meyers, 1
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LITERATUR Howard, C. J., J. Brownli
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LITERATUR Meyers, G. et al. "Rearra
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LITERATUR Schägger, H. and G. von
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LITERATUR Wiskerchen, M. and M. S.
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ANHANG Primer zur Erzeugung von Mut
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ANHANG CSFV: csfv4881.seq: gga cca
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Nov. 2002 Teilnahme an der Fortbild
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