Einfluss von Mutationen auf die NS2/3-Prozessierung und die ...

ERGEBNISSE
Abb. 3: Radioimmunpräzipitation zur NS2/3-Spaltung von Viren der klassischen
Schweinepest.
Nach metabolischer Markierung mit [ 35 S] Methionin / [ 35 S] Cystein wurden Extrakte infizierter
Zellen hergestellt und für die Immunpräzipitation eingesetzt. Die Präzipitation erfolgte mit dem
anti-A3-Serum. Die Präzipitate wurden durch SDS-PAGE (12% PAA, Gelsystem nach
Doucet/Trifaro) unter reduzierenden Bedingungen aufgetrennt. Die Zahlen am rechten Rand
geben die Molekulargewichte von Standardproteinen in kD an. Die Quantifizierung der NS2/3
Spaltung der von den einzelnen Viren exprimierten NS2/3- und NS3-Proteine ist in Abb. 4 zu
sehen.
Spur 1: nicht infizierte Zellen, Spur 2: Stamm Alfort/Tübingen, Spur 3: Stamm Brescia,
Spur 4: Stamm Riems, Spur 5: Stamm Eystrup, Spur 6: Stamm Iffa,
Spur 7: Stamm Glentorf, M: Größenmarker
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Spalteffizienz (%) .
80,00
70,00
60,00
50,00
40,00
30,00
20,00
10,00
0,00
Spalteffizienz verschiedener CSFV-Stämme
Alfort Brescia Riems Eystrup Iffa Glentorf
Reihe1 38,98 66,92 34,52 55,82 59,78 41,99
Abb. 4: NS2/3 Spalteffizienz verschiedener CSFV-Stämme.
Dargestellt sind die Spalteffizienzen der verschiedenen CSFV-Stämme. Für die Ermittlung der
angegebenen Werte wurden für alle Viren drei unabhängige Experimente durchgeführt. Die
Proteine wurden aus den Zellextrakten jeweils mit dem anti-A3-Serum präzipitiert und die
Präzipitate mittels SDS-PAGE aufgetrennt. Mit Hilfe des Phosphor-Imagers wurde die Stärke
der NS2/3- und NS3-Signale ermittelt. Unter Berücksichtigung der Zahl der Methionine und
Cysteine in den jeweiligen NS2/3- bzw. NS3-Proteinen wurde der prozentuale Anteil des NS3
an der Gesamtmenge von NS3 / NS2/3 berechnet. Die für jedes Virus aus den unabhängigen
Experimenten ermittelten drei Werte wurden gemittelt und hier als prozentuale Spalteffizienzen
angegeben.