Einfluss von Mutationen auf die NS2/3-Prozessierung und die ...

ERGEBNISSE
60
Mutation AS-Austausch Position Lebens-
fähigkeit
Stabilität
nach 5 Passagen
WT + +
43 G-> P P1´ + rev.
44 G-> D P1´ -
45 G -> S P1´ + +
46 G -> A P1´ + +
56 W -> A P4 + rev.
57 I -> R P3 + rev.
58 L -> E P2 + rev.
59 R -> A P1 -
60 R -> D P1 -
61 R -> I P1 -
62 R -> P P1 + rev.
63 R -> K P1 + rev.
64 R -> H P1 + +
Tab. 2: Lebensfähigkeit der CSFV-Mutanten
Aufgelistet sind die verschiedenen Mutationen, die im Bereich der NS2/3-Spaltstelle des CSFV-
Stammes Alfort vorgenommen wurden, und ihre entsprechende Position. Spalte vier zeigt durch
ein „+“ markiert diejenigen Konstrukte, die sowohl in der ersten als auch fünften Passage in der
indirekten Immunfluoreszenz positiv reagierten. In Spalte fünf sind die zum Wildtyp revertierten
Konstrukte (rev.) und die stabilen, auch nach fünf Passagen die Mutation tragenden CSF-Viren
(„+“) gezeigt.
Molekularbiologische Analysen der mutierten CSF-Viren zeigten, dass nur drei
der insgesamt neun lebensfähigen Viren nach fünf Passagen die eingefügte
Veränderung noch im viralen Genom enthalten hatten. Im Wachstumsvergleich
über den Zeitraum von 72 h zeigte sich zwischen den stabilen Mutanten und
dem Wildtyp kein signifikanter Unterschied. Nach der Infektion mit einer m.o.i.
von 0,01 erreichten die Titer der überprüften Mutanten und des Wildtyps
äquivalente Werte.
Virus CSFV-WT Mut 45 Mut 46 Mut64
KID50 nach 72 h 10 7,19
10 7,12
10 7,25
10 7,00