Labordiagnostik - Veterinärmedizinische Fakultät der Universität ...

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Einschätzung der Besiedelung der Zitzenhaut und des Zitzenkanals laktierender Milchrinder durch euterpathogene Mikroorganismen mit der Nass-Trockentupfertechnik nach DIN 10113-1: 1997-07 Jan-Hendrik Paduch, Volker Krömker Fachhochschule Hannover, Abteilung Bioverfahrenstechnik jan-hendrik.paduch@fh-hannover.de In der modernen Mastitisforschung nehmen Fragen zur Bedeutung des Zitzenkanals im Infektionsgeschehen eine immer wichtiger werdende Rolle ein (Heeschen, 2010). Die meisten Mastitiserreger dringen von außen aus der Umgebung der Zitzenkanalöffnung durch den Zitzenkanal in die Zitzenzisterne und das Euterlumen vor (DVG, 2002). Die Zitzenhaut und der Zitzenkanal von Milchrindern können daneben ein Reservoir für vor allem kuhassoziierte euterpathogene Mikroorganismen darstellen (Haveri et al., 2008; Piccinini et al., 2009). Hogan et al. (1989) zufolge steht die Entstehung von Umweltmastitiden in einem engen Zusammenhang mit den Keimdichten an der Zitzenspitze. Die Kolonisation und Infektion des Zitzenkanals mit Mastitiserregern kann nach Ansicht einiger Autoren sogar eine Vorstufe für eine Mastitis darstellen (Du Preez, 1985; Zecconi et al., 1992). Neben Staphylococcus aureus wurden bislang auch die mastitisrelevanten umweltassoziierten Erreger Streptococcus uberis und coliforme Keime sowie als weitere Keimgruppen u. a. Milchsäurebakterien und Anaerobier aus Zitzenkanälen laktierender Tiere isoliert (Du Preez, 1985; Du Preez, 1987; Watts et al., 1991; Zecconi et al., 1992; Gill et al., 2006; Espeche et al., 2009). Quantitative Kenntnisse zur Besiedelung der bovinen Zitzenhaut sowie des Zitzenkanals liegen bislang jedoch nur unzureichend vor. In verschiedenen Arbeiten wurden für die Untersuchung der Zitzenhautfloren in Milchviehherden angefeuchtete Tücher (Kagkli et al., 2007), Spüllösungen (Peters et al., 2000) oder einfache Tupfer eingesetzt (Rendos et al., 1975; De Vliegher et al., 2003). Für die Beprobung der Zitzenkanäle fanden ebenfalls einfache trockene Tupfer trotz des semiquantitativen Charakters der Methode Verwendung (Trinidad et al., 1990; Myllys et al., 1994). Die Nass-Trockentupfertechnik nach DIN 10113-1: 1997-07 stellt dagegen ein quantitatives Referenzverfahren zur Probeentnahme von Oberflächen dar, das für die Untersuchung milchberührender Oberflächen geeignet ist (Pfannenschmidt, 2003; Zimmermann, 2003) und bei standardisierter Durchführung die definierte Probeentnahme ermöglicht (Pfannenschmidt, 2003). Mit Hilfe der Nass-Trockentupfertechnik wurden in einer eigenen Studie insgesamt 460 Zitzenhaut- und 1110 Zitzenkanaltupferproben von laktierenden, eutergesunden Tieren kommerzieller Milchviehherden entnommen. Die Tupferflüssigkeit wurde nach der Homogenisation auf Staphylococcus aureus (Baird- Parker-Agar, Merck), Escherichia coli und coliforme Keime (Chromocult Coliformen Agar, Merck), äsculinspaltende Streptokokken (Kanamycin Äsculin Azid Agar, Merck) sowie auf Streptococcus uberis (mod. Rambach Agar nach Watts et al. (1993)) untersucht.
Die Ergebnisse zeigen, dass innerhalb der untersuchten Tiergruppe eine breite Streuung der Keimdichten sowohl für die Zitzenhaut (Tabelle 1) als auch den Zitzenkanal ermittelt werden konnte (Tabelle 2). In Zitzenkanälen laktierender Milchrinder wurden Keimdichten von bis zu 10 5 koloniebildenden Einheiten (KbE)/cm 2 für Staphylococcus aureus, coliforme Keime, Escherichia coli und Streptococcus uberis bestimmt. Tabelle 1: Keimdichten auf der Zitzenhaut nach der Probenentnahme mit der Nass- Trockentupfertechnik Keimgruppe Probenanzahl Minimum [KbE/cm 2 Maximum ] [KbE/cm 2 ] Staphylococcus aureus 460 0 4,4*10 4 Coliforme Keime 460 0 4,8*10 5 Escherichia coli 460 0 6,2*10 3 Äskulinspaltende Streptokokken 360 0 1,4*10 4 Streptococcus uberis 100 1,6 4,8*10 5 Tabelle 2: Keimdichten im Zitzenkanal nach der Probenentnahme mit der Nass- Trockentupfertechnik Keimgruppe Probenanzahl Minimum [KbE/cm 2 Maximum ] [KbE/cm 2 ] Staphylococcus aureus 1110 0 4,8*10 5 Coliforme Keime 1110 0 4,8*10 5 Escherichia coli 1110 0 4,8*10 5 Äskulinspaltende Streptokokken 360 0 6,0*10 3 Streptococcus uberis 750 1,6 4,8*10 5 Sowohl die Zitzenhaut als auch der Zitzenkanal können demnach ein wichtiges Reservoir für kuh- und umweltassoziierte Erreger darstellen. Mit Hilfe der Nass-Trockentupfertechnik ist es möglich, eine quantitative Untersuchung der Zitzenhaut- und Zitzenkanalbesiedelung unter Feldbedingungen mit einer Referenzmethode durchzuführen, um so den unmittelbar an der Milchdrüse wirkenden Keimdruck innerhalb eines Bestandes abschätzen zu können. Diese quantitative Methode erlaubt zudem die Einbeziehung weiterer Keimgruppen zur Untersuchung der Zitzenkanalökologie laktierender Tiere. Kenntnisse in diesem Bereich würden zukünftig eine systematische Steuerung der Keimflora gestatten und so die Möglichkeit zur nachhaltigen Beeinflussung der Mastitisentstehung über diesen Weg geben. Literatur. Liegt bei den Verfassern vor
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