Número 10-12 - Instituto de Historia de la Medicina y de la Ciencia ...

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CIENCl,l
esporuladu8, que presentasen propiedades antagonistas para
el bacteri6fllgo de RhizobiulIl meliloti. Para este fin se
cecogió el métcdo de la estrla en placas de agar-fago, con
el miEDlO criterio que se ha aplicado el métcdo análogo en
la blísqueda de microrganismos antagonistas para bacterias
y hongos (Waksman,1947). Los resultados de esta
selección se encuentran registrados en la Tllbla 1 y en ella
puede observarse que 9 CEpas, o sea e135% de las bacterias
aerobias esporuladas en estudio, resultaron con actividad
antagonista para el fago de R. meliloli. Es conveniente
TABLA 1
ACCION DE LAS BACTERIAS AEROBIAS ESPORULADAS SOBRE
EL BACTERIO~'AGO DE Rhizobium lIu/iloli Y SU HUESPED .
BacteriM nerobilUl Procedencia Acción antifllgo .~cci6n nntie8poruladns
bacteriana
.--------.----------1------
A-1-X Semillas
A-1-R Semillas
A-2 Semi lbs
A-3 Semillas
A-4 Semillas
A-5 Semilla8
:\.-6 Semillas
A-7 Semillas
A-8 Semill:\.8
A-8-TI. Semillas
A-U Semillas
A-lO Semillas
A-11 Semillas
A-12 Semillas
A-13 Semillas
A-14 Semillas,
A-15 Semillas
A-16 Semillas
A-17 Semillas
A-18 Semilll,lS
A-l9-R Semillas
A-20 Suelo
.A-21 Suelo·
A-22 Suelo
A-23 Suelo
A-24 Suelo
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+-
+
+
+
+ ...
+
+
+
+.
hacer notar que por el mismo método se demostró que 21
·de las cepas aerobias esporuladas, es decir 81 %, tuvieron
acción antagonista para la cepa de R. meliloti susceptible
al bacterió!ago.
Como primer' paso para poner en claro la causa de la
actividad antifago de las bacterias aerobias' esporuladas,
las 9 cepas que mostraron actividad por el método de la
estría, fueron examinadas colocándolas, convenientemente
suspendidas, en presencia de la preparación del bacteri6fago
y observando su efecto después de 24 horas de acci6n mediante
recuentos de placas líticas. Los resultados indicaron
que por este método 7 de las 9 cepas resultaron con marcado
efecto inactivador para el bacteriófago' de R. meliloti.
El grado de inactivación 'Varió con la cepa de bacteria aerobia
esporulada empleada en el experimento, siendo las cepas
A-1-X y A-1-R las que mostraron particular actividad
(100% y U7% de inactivación respectivamente).
Considerando; los resultádos obtenidos seleccionamos
estas dos cepas pam hacer un estudio más detenido que
condujese 'a esclarecer si el efecto inactivador era debido a
la producción de UDa sustancia antifago. Además de tener
presente su particular actividad, In. cepa A-1-R fué escogida
porque en el primer expe'rimento de selección demost.ró
tener efecto inactivador para el fago de R. meliloti y
t.!!ll1bién acción antagonista para su huésped, en tanto quc
la cepa A-I-X fué escogida porque únicamente resultó activa
pum el baeteriófago de R., meliloti pero no para ~u
huésped. Estas condiciones nos parecieron de importancia
porque sugerían la existencia de dos mecanismos distintcs
en la activación del bacteriófago.
Con estas dos cepas se hicieron diversus ensayo!> utilizando
diferentes medios de cultivo, habiendo re¡mltado de
mayor utilidad para la obtención de filtrados activos contra.
el fago, un medio compuest.o de triptona, 1 %; NaCI,
0,5% en agua de la llavc y a pH, 7,0 (Dubos y Hotchkiss,
1941). Las bacterias fucron cultivadas en este medio, previamente
distribuIdo el~ cantidades dé 150 mI en matraces
Erlenmayer de 1000 mI, dUl'ante.5 días a 28°; después del
período de incubación, se filtraron los cultivos a través de
papel de filtro y, en caso necesario, por una pequeI1a bujía
Berkefeld N o W.
Los filtrados de la eepa A-I-R 1ll0Ht,rarUII tumbit5n adi­
\·idad antibacteriana para la cepa de R. mcliloti suscept,ible
al fago, siendo el máximo de aetividud alcanzado, de 100
unidades R. meliloti por mI determinado por el método de
la estría (Waksman y Reilly, 1945). Los filtrados de la
ecpa A-1-X no tuvieron acción para el eultivo de Rhizobillm
susceptible al fago. Los resultados de dos experimentos
para demostrar la acción antifago dc los filtrados se encucntran
cn la Tabla n, en donde puede observarse que
las preparaciones obtenidas de la cepa A-I-X mostraron
mayor actividad antifago R. meli/.oli.
TABLA Ir
ACCION DE LOS FILTRADOS SOBRE EL BACTERIOFAGO DE
. Filtrado de la
cepa
A-I-R (lote 1)
I
Control
I
"
i
A-1-X (lote 1) Control
.' ,
I
-
A-I-R (lote 2) I
Control
. ' I
A-1-X (lote 2) I
Controi 1
Rhizobium melilo/i,
U nidade!! R. meliloti
por mi de.
la mezcla fUtradcrfago
..
.,
20
O
20
O
.
.'
.
.: 4h
",'
",.
i'
i
I
. .1
.1
I
I
I
·1
I
I
-
N úm. placas Uticas por mI
,__ , . ·... después de _ ,
102X10 15
200 X 10 15
; 26X10 15
200 X 10 15
.J.'
, , 24 h .
l.: .,,!,:.;
..
..
-
"
16,5X10 8
38 X 10 8
....
84 X 10 8
225,5 X 10 8
* Los filtrados de la cepa A-1-R tuvieron un~ potenci~ de
100 unidades R. meliloti/ml.
Utilizando tambi~n los filtrados de las mismas cepas de
bacterias aerobias esporuladas, se,hizo otro exp~rimento
con cultivos líquidos de Rhizobium meliloti a los cuales se
agregó simultáneamente la preparación de fa~o y el filtrado
por ensayar, o bien la preparación de fugo previamente so~
metida a la acción del filtrado. ,Los resultados aparecmi