NÃºmero 10-12 - Instituto de Historia de la Medicina y de la Ciencia ...

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1118 técnicas del "Manual oC Methods for Puro Culture Study of Bacteria" (3), y encontrándose que corresponden a la descripción que Bergey (2. a) da de 1118 mismas. Para el estudio "in vitro" de la acción de la penicilina sobre cada una de las especies de gérmenes mencionados, se siguió el método de 1118 diluciones en serie propuesto por Hoogerheide y descrito por Foster y Woodruff (13), con el cual, segl1n estos autores, puede ser obtklnida una exactitud de más o menos 15%. El inóculo de Staphylococcus aureu8 y Ps. aeruginosa, fué de 0,2 mI de un cultivo en caldo de 12 h, diluído hasta obtener una concentración aproximada de 600 000 000 de gérmenes por mi y el inóculo de B. anthracis y M. mallei, fué de 0,1 mI de un cultivo en caldo de 12 h de igual concentración bacteriana de la ya citada. , , Además del método anterior se siguió otro método de dilución en serie que difiere en las cantidades de penicilina empleadas, así como en el medio de cultivo, ut.ilizándose en éste el medio siguiente: Infusión de carne 1000 rnl, peptona 10 g, cloruro de sodio 5 g, triptosa 10 g, pH 7,6, seprcparó para cada cepa en estudio, una serie doble de once tubos conteniendo cada uno 5 mI del medio líquido, los que fueron inoculados con G,5 mi de un cultivo de 24 h en caldo y con' una concentración de gérmenes comparable en turbidez a la del tubo N 11m. 2 del nefclómetro de l\f c Farland. Inmediatamente después se añadió al primer tubo de ambas series 1 mI de solución de penicilina, conteniendo 1 000 u. ° y a los siguientes cn orden decreciente también 1 mi con cantidades de 500, 250, 125, SO, 25, 12,5, 5, 1,0,1 y 0,01 u. ° por mI. Estas series junto con los controles de esterilidad del medio y los controles del crecimiento se incubaron a 37°, durante 20 1 / 2 h, se verificó una" lectura previa a 1118 16 h de incubaCIón, determinándose la cantidad de penicilina, capaz de inhibir totalmente el crecimiento en cada caso.' , ' Los resultados obtenidos se expreSan en la Tabla 1. , Como una comprobación de los métodos anteriores se hicieron determinaciones de la actividad de la penicilina, por el método descrito por Abraham:et al. (1), así como con una variación del mismo, consistente en modificar el medio, emple~do uno similar al descrito anteriormente, pero adicionado de 2,2 g de gelosa yen lugar de infusión de carne, de corazón de ternera. Pué nécesario, asimismo, variar 1118 cantidades de penicilina adicionadl18 a los cilindrOs.' J.os resultados se en(:uentran expresados en la Tabla II. Pars. el estudio de la acción "in vivo", de la penicilirui. sobre los gérmenes, se utilizaron como animales de experimentación, cuyes con un peso aproximado de 250 g formando lotes de 4 para cada germen, excepto para M. mallei, para el cual se utilizaron 5 cuycs. De los lotes de4 animales inoculados con los gérmenes respectivos, 3 cuyes de cada lote fueron inyectados con 1 ÓOO u. 0, de penicilina en 1 mi de solución salina estéril, cada 12 h, durante 5 dí!l3 por vía subcutánea, y en el lote de 5 animales inoculados con M. m¡U1ei, 4 fueron tratados de igUal ¡:llanera. El cuy' restante sirvió como control de Wecci6n. ,',' , , Teniendo en cuenta el efecto tóxico de ruguri.os lotes de ' penicilina sobre el cuy que ha: sef1ruado Hamre el al. (15), se qispuso una serie de tres 'animales inoculados por la misma vía y tratados con 1118 mismas cantidades de penicilina, con el objeto de observar si esta sustancia era Clípaz, por sí sola de tener algUna influencia sobre la mortalidád, , , " lII. RESULTADOS ~., " Los resultados que se obtuvieron en, la experi- , mentaci6n "in vitro", se encuentran contenidos' CIENCI¿ en las Tablas comparativas 1 y lI, en donde se señalan las cantidades mínimas de penicilina que fueron necesarias en cada uno de los métodos para inhibir el crecimiento, o bien, en los métodos de las copas, el diámetro en mm de la zona de inhibición observada, suprimiéndose la expresión de resultados n~gativos o no interesantes. Los resultados de la experimentación "in vivo", fueron estudiados mediante el sacrificio d,e los animales a los 10 días después de haberse hechó la inoculación con génnenes vivos, procediéndose a efectuar la necropsia de ellos y haciendo cultivos de los órganos o tejidos que se encontraron afectados. Aun en los casos en que no se observaron lesiones aparentes, se efectuaron estos mismos cultivos, tanto en medios sólidos, como líquidos. En los cuyes inoculados con Pseudomonas aeruginosa así como en los inoculados con M. mallei, no fué posible encontrar ningún efecto apreciable de la penicilina en el desarrollo de la infección causada a 10& cuyes, después de la infección experimental. De los 3 cuyes inoculados con B. anthmcis y tratados con penicilina, 2 de ellos murieron antes de recibir un total de 5 000 u. 0, encontrándose en la necropsia, en las bacterioscopías y en los cultivos; la comprobación de haber muerto a causa de la infección antrácica. El tercer cuy inoculado y' tratado con penicilina, sobrevivió hasta ellO? día, sin presentar lesiones,' y en la necropsia, 'además de no haberse encontrado lesiones, no fué posible aislar de sus órganos o tejidos el germen inoc,ulado. ' El cuy control murió presentando las lesiones típicas' de la infección experimental por B. anthra-' cis, 4 días después de la inoculaci6n'." ,,~ ;'1'; ,- "LOs cuyes inoculados con Staph.'aureUsy tra-: tados con penicilina, sobrevivieron ala infe
H ,~, TABLA .1 ACCION INHIBIDORA DE LA PENICILINA "IN VITRO" SOBRE LOS GER,\IENES EN ESTUDIO Cantidades m(nim:\8 de peniciliu!1. suficientes para producir inhihición total ,Iel crccinuento Técnica de Hoogerhcide, Técnic:\ de las diluciones, Control Cont.rol : leelura a 1M lectura a las esterilidad 'crecimiento - Hlh ·20 h 30' 16 h 20 h 39' , - , , Staph. aureus . .'............... : 0,04 mI 0,04 mI 1 u./) 1 u.O - + Serie 1 ; , , , Stq,ph. aur,eus . ................. 0,04 mI 0,0.1 mI .1 u.O 1 u.O - + Serie' JI Ps. (u:ruginosa . ................ No inhibió' No inhibió No inhibió No inhibió - .. + I Serie 1 " '. , - !'s. aeTuginosa . ................ No inhibió No'i~hibió No inhibió N o inhibió . - + ' . Serie II .. . ' ,. , B. al1thracis . .................. No inhibió No inhibió 5 u.O " 5 u.O - ,", +" Serie 1 , .. " B. ardhracis. . .......'.......'... No inhibió No inhibió , 5 u.O 12,5 u.O - + Serie JI ; • M. maliei . .................... No inhibió No inhibió No inhibió No inhibió + Serie 1 1 1 " . .'. ! !!¡ """ ' ., , '. " : M. mallei. o ••••••••• , ...... , , No inhibió No inhibió No inhibió No inhibió - +. Serié JI ; Por el método de Hoogcrheide el Slaph. aureus es inhibido con 0,04 mI-de una solución 'de penicilina que contiene 0,6 u.O por mI, es decir, con 0,024 u.O, por el otro método necesita 1 u.O. La peniciliim no mostró efecto alguno sobre el . creeiIniento de Ps. aeruginosa y M. ';nallei. El B. anthracis no es inhibido por el método de Hoogerheide pero sI por' " el otro empleado, necesitando en este caso la~erie JI, 5 u.O a las 16 h', Y 12,5 u.O. a las 20 h 30 mino . . . '. "" - , ' !' • res con'centraciones de penicilina, y ampliar la po~ trabajo, ~o demostró l1inguna ~ctividad inhibido': . . sibilidad de observar la inhibici6n, como en el caso ra para la Ps. aeruginosa ni tampoco" para el M.: del B .. q,nthracis, en que por 13, téc~~ica de Ho~ger- mallei.' . . l. ..' , J '1. " • ¡; heide no 'se lo~6 la inhibici6n, en'tanto que co'n, : La penicilina en ias dosis empleadas, 'no mos:"': la técnica modificada, 5 U. O, de pe~iciiina, pr:~du- tr6 efecto tóxico ninguno, sobre los 3' cu'yes' tratájerort ~alinhi?i.ci6~ .. :.. ,,,', .... .....".;'> ~: d.os por.·esta sustancia y que sirvie~'on_de control,.' . El área de mhlblc16n obtemda. con la cepa de 'sm ser moculados 'con gérmenes. :.' .'! . '. J " '. ': sidph. 'au;eus, fué sola~ente de 10 ~m co~ 1 U. O,' - '. empiea~do latéc~ica' de Abraharn, .por i~' que, sh~.: .'-V: RESUMEN . poni~n~o que la soluci6n qe p~nid.lina ~sad.a t~-' " ',/ I vier~ la éonceritraci6n 'calculada, ·es. de aceptarse En el presente trabajo se hace'un estudio de la la posibilidad sugerida por Foster y Wilker (12), actividad _de la penicilina, tanto "in:vitro'~ como· de que las diversas cepas de StaphylococCus pueden "in vivo",' sobre Staph; aureus, B.anthracis, Ps.: presentar amplias 'variaciones en lo qúe re'specta a' aeru{jinosay M~mallei: : . . ..... , su' susceptibilid~d ...... ':' . ". . Para el estudio "in'vitro",'s~'erriplear~nla~rtéc~ Las variaciones adoptadas 'en los constit~y~n- nicas de Hoogérheide, y:deAbraham, así com~' tes de los medios de cultivo utilizados en la modi- modificaciones:de las'mismas siÍl: haberse encon-. ficaci6n de las técnicas citadas, fueron obligadas trado nmguna' ácci6n inhibidora de la penicilinapara facilitar el crecimiento del Malleomy'ces ma- sobre la [>s. aer'l.lginása y el 1i1: mallei .., Emplean'do: llii. :'. ., ' . , .. - " ' .." la modificación al mét6d~ de Hoogerheide,,:se en-. j. " .' ", • '.: '. ,". Los resultados obtenidos'éi la experimentación contr6 que 5 U. O de penicilina producían la inhibici6n "in.vivo" con B. anthi'acis,. nos indican qué el tra':" tamiento con penicilina s6lo fué :capaz de' inhibir parcialmente la infección eXperimental, y que la.' del desarrollo de B. anthracis, en tanto que para Staph. aureus, se obtuvo la' inhibici6n con la técnica ya citada, de Hoogerheide con 0,024 I _ ."'~ 1· ., _ penicilin~ en las condiciones en que se realiz6 este U. O:.' '\ -, " j. '1": 290
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