Número 10-12 - Instituto de Historia de la Medicina y de la Ciencia ...

CIENCld
bajo la forma de globulinas, la conservación y estandardización
de la potencia del producto se vedan
facilitados.
De acuerdo con los investigadores rusos, para
la utilización del suero en el tratamiento de enfermos
humanos se requiere un título mínimo del suero
de 1 :100 en la reacción de fijación del complemento,
pudiendo utilizarse todos aquéllos que den
un título mayor, sin especificar hasta qué grado
Son aceptables los altos títulos, circunstancias que
clínioamente constituyen un problema en lo que
respecta a la observación de los resultados y a la
dosificación del suero en el tratamiento, ya que es
de esperarse que se obtengan resultados diferentes
al variar el título de aquél. Por otra parte la conservación
del suero durante un tiempo largo ha
sido difícil de realizar, concediéndose en términos
generales seis meses de duración a la actividad de
este producto. Como un aporte modesto a la resolución
de estos problemas se ha realizado el presente
trabajo en los Laboratorios de Bacteriología de
la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, contando
con la ayuda prestada por los Laboratorios Dr.
Zapata, S. A., en donde se efectuaron la concentración
del suero y los análisis electroforéticos.
MATERIAL y METODOS
Purificación del stlero.-El suero crudo obtenido en las
condiciones señaladas, o en condiciones similares, es el que
se ha venido empleando normalmente previa dilución para
llegar al título deseado. Los incovenientes del uso de este
suero crudo son principalmente dos; en primer lugar, los
individuos inyectados se sensibilizarán aun cuando se usen
cantidades relativamente pequeñas en cada dosis, pero
dado que éstas son varias, en las últimas pueden presentarse
fenómenos séricos; en segundo lugar, la interacción de las
distintas proteínas del suero en estas condiciones de dilución
produce precipitaciones que son muy visibles al cabo
de cuatro o cinco meses de efectuada dicha dilución aun
cuando se mantenga refrigerado, y que comienzan a producirse
desde el primer momento, lo cual origina una desaparición
progresiva de las moléculas específicas de 'Y-globulinas,
con la correspondiente disminución. del título del suero
lo que equivale a una pérdida de potencia.
Estas fueron las principales razones que nos llevaron
a efectuar la purificación del suero, basada esencialmente
en el método desarrollado por Cohn y sus colaboradores y
aplicado .por Bolívar (1947) a la purificación de la antitoxina
diftérica en los plasmas de caballo.
La sangre citratada, recogida según la técnica descrita,
se centrifuga en una centrífuga Sharples entre 20000 Y
30000 r. p. min con un cilindro especial separador de glóbulos
rojos, obteniéndose de un 60 a un 65% de plasma. Esta
separación se efectúa a temperatura ambiente e inmediatamente
después de ;recogida la sangre. El plasma obtenido'
en estas condiciones se enfría lo más rápidamente posible
agitando continuamente y evitando la formación de hielo
y de espuma, hasta llegar a 0°, temperatura a la cual se
comienza a agregar en forma de chorros capilares, sin dejar
de agitar, una mezcla etanol-agua al 53,3% hasta llegar a
una concentración alcohólica del 8% y ajustán!J.ose el pH
a 7,2 ± 0,2 con regulador acético-acetato de sodio. Du-
mnte esta adición se va bajando la temperatura paulatina-
mente hasta llegar a -2,5° al terminar la adición del preci­
pitante, continuándose la agitación durante 3 h después.
Estas condiciones se logran trabajando en una cámara fri­
gorífica a 0° y haciendo uso de un serpentín refrigerante
termostatizado que se introduce en el plasma.'
La fracción precipitada está constituída en su mayor
parte por el fibrinógeno que se encuentra muy ligeramentc
coloreado debido a una pequeña cantidad de hemoglobina
liberada por la ruptura de algunos glóbulos rojos, durante
Preparaci6n delsucro.-:-EI antígeno utilizado para la
preparación del S. C. A. fué obtenido de la médula ósea y
del bazo de cadáveres de individuos jóvenes que no tenían
más de 12 h de haber muerto en un accidente, teniéndose
precaución especial de que no hubieran padecido enfermedades
infecciosas, tumorales o crónicas, verificando ésto
por medio de la necropsia.
Las costillas, porciones del esternón, así c.:>mo el bazo,
fueron recogidos en frascos estériles y transportados en refrigeración
al laboratorio, en donde se procedió inmediata-
mente a la preparación del antígeno según técnica descrita
por l\-Iarchuk (1943), con una variante del método original, la separación del plasma. Este precipitado se separa delli- ,
ya que los tejidos fueron triturados por medio de una licua- quido sobrenadante por centrifugación en una Sharples endora
eléctrica cuyas cuchillas giraban aproximadamente a tre 30000 y 35 000 r. p. roin a -2,50. ,."
10 000 r. p. mino Esta trituración se llevó a cabo durante - Al líquido transparente obtenido se le continúa agreun
período de' 10 min y el producto obtenido fué centrifu- gando de la misma. fOflna mezcla alcohol-agua hasta llegar
gado inmediatamente sin mantenerlo a températura am- a una concentración alcohólica de 18%, mientras se baja
biente durante 30 min: . -
la temperatura hasta ~5°. con agitación continua y mante-
Ei ~nt.ígeno se inyectÓ 'en dos cabras jóvenes:antes de niendo invariables el. pH y la· fuerza iónica.
transcurridas tres horas de la recolección del m3.terial de los Este segundo paso se efectúa en una cámara frigorífica
cadáveres, en dosis progresivas con intervalos de tres a cua- a _5° y haciendo uso de un serpentín refrigerante termos~
tro días entre cada inyección, empezando con una dosis de'" tatizado. El precipitado se separa como en el caso anterior
3 cm 3 y aumentando ésta gradualmente hasta inyectarse pero a -5 ° para lo cual se emplea un serpentín refrigerante
30 'cm 3 por vía endovenosa en la octava. A partir de la ter- que posee la Sharples que absorbe el calor producido por la
cera inyección las dosis aplicadas por vía endovenosa fue- fricción' del rotor con el aire. .
ron precedidas, coñ una anticipación de 24 h, Por una inyec- El precipitado obtenido se suspende en una solución
Ción de'igual volumen de ,ul).tígeno por vía intraperitoneaL reguladora con un pH de 7,2 ± 0,2 e isotónica, que contie-
Seis días después de la última dosis de antígeno los ani- ne fosfato disódico, hidróxido de sodio y cloruro de sodio,
rruiles fueron sangrados, obtimiéndose 1 000 cm 3 desangre por medio de I3. licuadora ántes descnta y habiendo ende
uno de ellos y 800 cm 3 del'otro; la sangre se recolectó friado el regulador previamente a O°. Se adiciona' un 5%
en.recipi~ntes estéz:iles. qu~. C.9lltel!Ían solución .cl~ (!i.trato de tierra de infl,lsorios y se pasa a través de un filtro Seitz
de sodio .. para.evitar la coagulación, excepto una muestra estéril con discos cliuificadores.y esterilizadores, obtenién~